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suite Culture 3D des cellules tumorales - Coggle Diagram
suite Culture 3D des cellules tumorales
Méthodes d'analyses
Test de viabilité 3D
MTT non adapté car faible pénétration dans tissu et formanzan insoluble
CellTiter-Glo 3D : ATP des cell vivantes catalyse form° d'un produit luminescent, l'oxyluciférine, à partir de luciférine grâce à luciferase → corrélation entre nbr cell vivantes et luminescence
Test de migration/invasion en 2D
Chambre de Boyden : culture sur mb poreuse → chambre inf avec agents chimioattractants → quantif°
Test de blessure "Wound healing assay"
Test de migration à base de sphéroïdes : "Spheroid-based migration assay" → prise en compte de l'architecture 3D et des interactions c/c
Visualisation in situ de prot dans modèle 3D
Immunomarquage sur spheres tumorales entières et obs° au microscope confocale
Fixation/perméabilisation basées sur incubation avec solution PFA + Triton et bains croisances et décroissants de métanol
Validation protocole : étude exp° prot nucléaires, cyto et membranaires en immunohisto et cyto en flux
Transparisation
= clearing
Suppression ou reduction opacité des cell dues aux lipides mbr sans endommager cell, décoloration des pigments, homogeneité des indices de refraction
Technique de transparisation : a base de solvants organiques ou d'agents hydrophiles
Intérêt des modèles de culture 3D et applications cancer
Intérêt scientifique
Modélisation d'un tissu : rôle structure 3D, rôle µenv, rôle confinement
Fonctions proches des cell de la situation in vivo : dif°, polarité, migration dans gel, prod° d'éléments intervenants dans relations c/c et c/MEC
Cellules difficilement distinguables individuellement
Pertinence par rapport à 2D
Resistance à chimio, paramètre cellulaire ou génétique
Rôle fondamental heterogenité tumorale dans resistance
Distribution limitée à partir des vaisseaux de la plupart des chimio ce qui réduit efficacité
Diffusion des chimio in vivo limitée par : les grandes distances entre vaisseaux, compo EMC, adhesions intercell, haute pression qui existe au sein du liquide intersticiel, abs convection, leur métabolisme et leur liaison sur diff mol
Applications
Migration /invasion : eval° adhésion et invasion, nourgeonnement, polarité inversée
Tumorigenese : introduction de mut°, éval° tumorigenicité des organoïdes (triple-, quatriuple-mutants), éval° instabilité chromosomique
Criblage haut débit : lignée épith tumorales du panel du NCI capable de générer des sphéroïdes, possibilité automatisation, suivi surface occupée par spheroides, test de viabilité en point final, plaques optimisées pour form° et analyse des spheroides
CSC : etablissement tumorosphere, resistance, effet dissociation des tumorospheres avant ttt, form° d'organoïdes
RI : utilisation tumeur sur puce pour éval° préclinique de LT génétiquement modifiés pour eprimer TCR spé d('Ag tumoraux, invasion LT, interaction LT avec cibles et induction mort cellulaire, eval° effet cytotox, eval° effet d'un env hypoxique et inflammatoire sur act cytotox (dif si cell isolées ou shperoides)
Médecine perso : utilisation explants tumoraux pour prédire réponse du patient, identif° et caract° des composants de la MEC, éval° viabilité et prolif en présence cocktail de MEC retenu (préservation partielle et prolif + imp que pour MEC conventionnelles), influence sérum autologue sur prolif et voies de signa, effet asso cocktail + sérum, corrélation entre réponse ex vivo des explants et in vivo des PDX/patients