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ETAPAS Y PROCEDIMIENTOS DE LA PCR - Coggle Diagram
ETAPAS Y PROCEDIMIENTOS DE LA PCR
Ingredientes basicos
Taq polimerasa
Cebadores
ADN molde y nucleotidos
Pasos basicos
Desnaturalizacion
Se da a 96° C donde la reaccion se calienta bastante para separar, o desnaturalizar, las cadenas de ADN.
Templado
Se da a una temperatura de 55 - 65° C donde la reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus secuencias complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla.
Extension
Se a a 72° C en la cual la temperatura de la reacción se eleva para que la Taq polimerasa extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN.
Este ciclo se repite de 25 - 35 veces en una prueba PCR estandar que demora entre 2 - 4 horas
Procedimiento para amplificar ADN de la sangre
Reactivos, material y muestra
Reactivos:
Latex anti-PCR
Suero control +
Suero control -
Diluyente glicina Salina
Material
Muestra de suero
Placa de reaccion
Pipetas
Muestra
3.0 mL de sangre
Procedimiento
Agregar a un tubo de ensayo 95mL de Diluyente glicina-salina concentrado pH 8.2) diluido
Añadir 0.05mL del suero problema.
Esperar 1:20 para que la dilución obtenida esté lista para usar
En un círculo de la placa, depositar 0.05mL del
suero diluido
En otro círculo depositar una gota del suero de
control +
En un tercer círculo depositar una gota del
suero de control -
Añadir a cada uno de lo tres círculos una gota
del Latex anti-Proteina C reactiva
Mezclar manualmente la placa de reacción
durante 2 minutos
Realizar la lectura del resultado bajo una luz
directa
Debido a su gran variedad de uso y procedimiento se tomo como ejemplo amplificar el ADN obtenido de la sangre