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CH19 - Coggle Diagram

- - - - 因為成熟的mRNA只有exon，而cDNA來自mRNA的反轉錄
        
        mRNA+反轉錄酶
        
        單股cDNA
        
        再加入聚合酶
        
        dsDNA
  - - - 使用螢光標定(P32)的probe和目標互補
        
        P32和mRNA上的核酸用氫鍵互補
  - - - mRNA自tissue中分離
        
        mRNA片段化
        
        反轉錄成cDNA
        
        cDNA和microarray(已標定已知基因)混合
        
        掃描microarray，螢光得知cDNA和誰互補
- - - - 模板股(目標股)會先被放大
    - - 目標股可以很長
        
        打斷DNA變成片段
        
        一個片段和一個bead分在一起並接上(以5'端接上)
        
        加入primer和聚合酶
        
        依次加入dNTP(A、T、C、G)再洗掉(重複此步驟)
        
        當dNTP成功接上後，PPi會釋出並閃光
        
        1 more item...
    - - 一般的dNTP、不同螢光標定的ddNTP和目標股一起進行PCR
        
        當PCR時若遇到ddNTP複製就會終止
        
        因此會產生多種帶有不同顏色的片段
        
        跑膠分開它們再進行排序
  - - - annealing
        
        50-60 primer附著
      - extension
        
        dNTP附著
      - denaturation
        
        95度雙股打開
  - - - 但真核基因無法被細菌表現基因或製造蛋白
        
        解決方法有兩個
        
        改用更強的prokaryotic promotor promotor
        
        改用酵母菌做為表現系統(具plasmid且是真核生物)
        
        但表現哺乳類蛋白依舊有困難
- - - - 體外誘導基因突變，破壞其功能
    - - 用RNAi使基因不表現
  - - - 疾病allele的表現與否有時和non-reconding區的單一鹼基對(SNP)有關(SNP會和疾病基因連鎖)
        
        SNP=single nucleotide polymorphism，即單一鹼基對多樣性
- - - - 移植細胞核形成一個新的完整個體
        
        ex. 桃莉羊
        
        桃莉的提早死亡或許是因為incomplete reprogramming
        
        哺乳類在從受精卵發育的過程中會重新編輯自身DNA，但桃莉沒辦法(因為它是直接複製別人的老細胞)
        
        有時複製體會長的不太一樣
        
        因為巴爾氏體會shut down某些基因
        
        複製體會有基因缺陷
        
        因為epigenetic
        
        原個體基因通常已epigenetic，但對複製體而言這些修飾太早就發生，造成某先基因在一開始就失去功能
        
        所以複製前最好先reverse epigenetic
    - - embryonic stem cell
        
        全能幹細胞
        
        能分化成各種組織
      - adult stem cell
        
        只有血球和間質幹細胞
        
        只能分化成血球和間質
      - iPS
        
        透過retroviral vector在skin fibroblast cell 身上轉入調節幹細胞的基因
        
        skin fibroblast cell變為iPS(幹細胞)