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葡萄球菌鑑定實驗 - Coggle Diagram
葡萄球菌鑑定實驗
實驗材料
培養基
Mannitol Salt Agar:粉紅色
Mueller-Hinton Agar:透明
藥品:5μg Novobiocin Disc×3
菌種
表皮葡萄球菌(S, epidermidis BCRC 11030)
腐生葡萄球菌(S. saprophyticus ATCC 10913)
金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ATCC 25923)
工具
酒精燈
鑷子
37°C 培養箱
接種環
ATCC 為美國菌種保存中心簡稱，BCRC 為台灣菌種保存中心，在此表示菌株是從哪裡買來的
問題與討論
Q:Mannitol Salt Agar 鹽度越高會對葡萄球菌生長有什麼影響?
A:葡萄球菌耐高鹽，在 10~15%NaCl 中生長情況最好，超過 15%則生長趨緩
Q:你認為大腸桿菌接種在 Mannitol Salt Agar Test，其結果如何?你認為此做法是否適當?
A:不行，因為大腸桿菌沒辦法忍受高鹽度的 Agar，所以大腸桿菌無法生長
Q:醫檢師剛從病人局部感染性化膿部位採取檢體後，
接下的工作要如何完成。請簡述之?
A:(1) 依照不同的檢體進行不同的前處理法，再依檢體的不同，推測可能被哪些細菌感染
(2) 染色先看是革蘭氏陽性或陰性菌，再種植到不同的培養基上，隔天或幾天之後依照第一次 的培養結果(培養基顏色變化、菌落生長、氣體產生的有無等等)再來進行第二次推測
(3) 接種到新的不同培養基上，有時需要染細菌鞭毛等等的特殊染色，找出感染的菌名，接著 做抗生素敏感性試驗，找出哪種抗生素，哪種劑量，對感染病人的這株細菌有效，以建議醫 師使用，避免病人死於菌血症或蜂窩性組織炎需截肢
(4) 在接種的過程中都要要求無菌操作
Mannitol Salt Agar Test(MSA Test)
實驗步驟
接種環沾取足夠菌量劃 Y 字型，
再做一次從反向劃回去(不同菌株不要靠太近)
放進 37°C培養箱，24 小時後觀察生長狀況
在培養基背面用簽字筆劃分成 3 區
實驗結果
S, epidermidis:呈粉紅色，因為不會發酵 Mannitol，故不會改變酚紅的顏色
S. aureus:呈黃色，會發酵 Mannitol 使 pH 下降故酚紅改變至黃色
S. saprophyticus:呈黃色，沒有 SA 那麼黃。
其為 CoNS 裡可以發酵 Mannitol 的一種葡萄球菌。
故需要配合 Novobiocin Sensitivity Test 來進一步鑑定
實驗目的
了解不同革蘭氏陽性菌之間生理及生化特性上的區別
判別葡萄球菌中金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌
實驗原理
Mannitol Salt Agar Test(MSA Test):鑑定 S. aureus 和 CoNS
培養基為高鹽(7.5%NaCl)、
含甘露醣(Mannitol)的
粉紅色 Agar Plate
只有 S. aureus 會發酵 Mannitol 產生酸，
利用酸鹼指示劑的顏色變化即可區分
本實驗中使用酚紅(Phenol Red)作為指示劑(6.0 黃;6.7 橘;7.3 紅)
S. aureus 會發酵甘露醣產生酸，pH 值降低，Agar 呈黃色
S, epidermidis、S. saprophyticus 等 CoNS 通常不會發酵甘露醣，pH 值不變，顏色也不改變 (但學校的 S, epidermidis 部分也會出現發酵 Mannitol 的現象，Agar 呈黃色)
Novobiocin Sensitivity Test:鑑定 CoNS
Novobiocin 為香豆素類抗生素的代表藥物，
針對 DNA 解旋酶(DNA Gyrase)抑制細菌的複製
※DNA Gyrase 為第二類拓樸異構酶(Type II Topoisomerase)的一種，能解開 DNA 超螺旋
只有 S. saprophyticus 對 Novobiocin 有天然抗藥性(Intrinsic Resistant)
Novobiocin 類似青黴素，
主要用於治療抗藥性金黃色葡萄球菌(MRSA)引起的感染
如肺炎、敗血症，對嚴重感染療效較差，且易引起細菌抗藥性
Novobiocin Sensitivity Test
實驗步驟
在培養基背面用簽字筆劃分成三區
3 株菌株用接種環沾取足夠菌量，塗滿各自三分之一區域，
形成 Bacterial Lawn
用燒紅冷卻過的鑷子將 5μg Novobiocin Disc(NB)貼於培養基表面，並輕壓一下
放置於 37°C 培養箱 18~24 小時後，測量抑制圈之直徑
實驗結果
抑制圈≦17 mm 才算有抗藥性
由實驗結果可知 Novobiocin 可將 SS 區分出來(具抗藥性)
將 SE、SA 比較可知 Novobiocin 對 SE 藥效較強
抗藥性：ss>sa>se
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