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Cytologie - Observat° au ME - Coggle Diagram
Cytologie - Observat° au ME
limite MO
grossissemt max : X1000
résolut° : 0,2 µm
R = 0,61 lambda/(n*sin alpha)
si augmenter grossissemt, améliorer résolut° = diminuer sa valeur
remplacer photons par électrons
plus il y a kV, + lambda courte
performance ME
résolut° théorique
100 000 fois mieux
200 nm/100 000 = 0, 002 nm
= 2 pm
résolut° réelle
seulemt 0,5 nm = 500 pm
améliorat° ?
angle alpha 35'
grossissemt 2 000X-200 000X
structure
filamt tungstène chauffé libérant e-
augmenté par canon e- (en ht tube) permettant lambda basse = résolut° basse
lentille électromagnétique permettant passage e-
contrairemt au verre
pixel
blc si e- passe pas
noir = si e- passe
plus élémt dense : retient e- = noir
= ombre e- retenu
travail ds vide
immense tube à vide vertical
img formé sur écran en bas
monochromatique
tissu = esb C territoriales, fonctionnelles, bio
cytologie
visualisat° + détails
memb
organites
amas prot
préparat° échantillon
plus ptt, + se dégradent vite
ex : mitochondrie dégradé en 20 s
doit ê fixé
fixat° précise détails
immédiate
glutaraldehyde
liaison covalence avc e-
moins dégats
formaldehyde
perfus° transcardiaque
entrée par valve droite
ouverture sur valve gauche
e- traverse mat org sans révéler quoi que ce soit = pas contraste
atome bio léger/peu dense
intro métaux lourds aussi fixateurs = contraste classique
tétroxyde d'osmium pr lip
fixat° memb Cr trilaminaire
pr prot : glutaraldéhyde
métaux lourd bloquant e-
pas colorant
inutile si pas MO
étapes
perfus° transcardiaque
dissect°
post fixat° par immers° où glutaraldéhyde
rinçage
post fixat° par immers° où tétroxyde d'osmium
rinçage
bains d'alcool progressif de 70 à 100 %
oxyde de propylène
inclus° ds résine
imp
A. fixat° détails
B. coupes + fines
pas couleur ms métaux lourds
pas lame
pas air : vide
coupe fine
ultramicrotome
lame en verre ou diamant
50-100 nm ep
rigidificat° échantillon par inclus° en résine
observat°
dépôt sur grille métallique ou film de support
chambre d'observat° sous vide
échantillon minuscule ne pouvant ê coupé
1.échantillon en suspens° ds solut° tungstène
dépôt d'1 goutte sur film support
évaporat°
colorat° négative
ombrage/tempête de neige
projectif de métal sur plaque
dépôt manière inégale sur relief
calcul htr via théorème Pythagore
observat° structure subCr
cryofracture = congélat° puis fracture en 2 = surf de fracture
a. ombrage métal (platine)
c. dissoudre = fossilisat°
b. recouvremt carbone pr lier part métalliques 1 aux autres
reconnaissable avc craquelure
cryodécapage profond (pr cytosquelette)
m^ procédé cryofracture ms avc sublimat° = solide à gaz
partie avc eau s'enlève = reste juste cytosquelette
enlever partie org où bcp eau
structure subCr
noy
euchromatine = - sombre
hétérochromatine = + sombre + condensé
transcript° pr ARNm sortant noy par pore nucléaire
pore nucléaire
coupe tangentielle = un peu aspect globe terrestre
lamina nucléaire = couche lamine et prot sur face int
maillage lamina
nucléole
partie fibrillaire = gène codant pr ARN précurseurs
partie granulaire = sous-unités ribosome
RE
ribosome
traduit ARNm via AA en prot
sur memb ext des citernes du RE
dilaté car product° énormémt prot
prot murie ds Golgi
tâches noires = vésicules ou granules proches Golgi
REL
pas ribosome = pas traduct°
Golgi
maturat° prot
CIS = + proche RE
accueille vésicules à maturer
TRANS = produit vésicules où prot fonctionnelle
plus dilaté qd + actif
mitochondrie
memb int + ext
chaîne respiratoire
ADN mitochondriial
transmiss° uniquemt par mère
avc tubules
cytosquelette
actine ds microvillosités
maintien
microtubule = mouv
constitue centriole ds noy
centrosome constitué d'1 paire de centrioles
corpuscules basaux
à base microtubule
en triplets
pr cil : doublet à extrémité
filamt intermédiaire
lamina nucléaire
MEB
e- traverse pas échantillon ms rebondit dessus
rayonnemt primaire rebondit sur surf = e- 2ndr
intéract° entre rayonnemt et surf échantillon
pas résine