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1º geração, 2º geração, 3º geração, 4º geração, Exercício 11 - Eliza Scala…

- - - - Geração de amplicons
        
        Produto heterogêneo de cada uma das quatro reações é aplicado em canaletas diferentes de gel de poliacrilamida
        
        As bandas são visualizadas na chapa de radiografia
- - - - Apenas um único tipo de fragmento se liga a uma determinada microesfera
        
        AS microesferas são capturadas individualmente por gotículas oleosas onde o PCR por emulsão ocorre
        
        Milhares de cópias do fragmento alvo são produzidas nessa fase
  - - - São fornecidos os reagentes para a reação de pirossequenciamento.
        
        Cada nucleotídeo incorporado liberará um pirofosfato que será convertido em luz
- - - - Incorporação dos nucleotídeos não marcados com fluorescência até que toda extensão se amplifique
        
        Formação de estrutura em ponte
        
        Desnaturação do Duplex
        
        Os adaptadores livres se ligam a adaptadores complementares na placa iniciando um novo ciclo
        
        Cluster sendo formado em que conterá milhões de cópias do mesmo fragmento
        
        Adiciona-se didesozinucleotídeos terminadores reversíveos contendo fluoróforos + enzima DNA polimerase
        
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- - - - Excitação do fluoróforo que emite fluorescência dependendo do dinucletídeo incorporado
        
        Clivagem num ponto especifico da sonda liberando três bases universais e fluoróforo.
        
        Um nova sonda é adicionada e a clivagem é feita novamente, esse passo se repete inúmeras vezes
        
        A dupla fita de DNA é desnaturada e inicia-se a segunda etapa de sequenciamento
        
        Processo é repetido
- - - - São adicionados nucleotídeos com marcação luminosa
        
        Utilizada na análise das imagens geradas para identificação de qual base foi incorporada.
- - - - é removido e detectado após a incorporação de um nucleotídeo na fita
        
        Nos poços os nucleotídeos marcados são mantidos em concentrações elevadas permitindo alta efeciência.