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MÉTODO DE RITCHIE ritchie - Coggle Diagram
MÉTODO DE RITCHIE 
TÉCNICA
Emprego do formol e do éter com a finalidade de fixar e concentrar as estruturas parasitárias e separá-las dos detritos e gorduras fecais.
Baseia-se na sedimentação através da centrifugação e na lavagem do material com éter, um solvente orgânico que forma uma fase apolar, que retém artefatos vegetais e toda gordura contida na amostra, durante a centrifugação da suspensão das fezes
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INDICAÇÃO
O método de Ritchie tem como objetivo a identificação de doenças parasitárias, a partir da visualização de cistos e ovos presentes nas fezes do indivíduo, e eventualmente a presença de larvas.
DESVANTAGENS
O inconveniente deste método é a utilização do éter, material inflamável, volátil e explosivo. Por isso algumas modificações têm sido sugeridas por alguns autores, como por exemplo a substituição do éter pelo acetato de etila, que além de ser menos inflamável, aumenta a eficiência do método na detecção global de formas parasitárias.
Uso de diversos reagentes “perigosos” que exigem um tratamento adequado durante o descarte e lavagem do material.
Não pode ser usada para os ovos “pesados” de helmintos, principalmente ovos de Schistosoma mansoni e ovos inférteis de Ascaris lumbricoides.
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Geralmente são empregados métodos de coloração para visualização dos oocistos, com o por exemplo, lugol e Ziehl-Neelsen modificado.
Utilizado principalmente para detecção de oocistos de coccídeos: Isospora belli, Cryptosp oridium sp e Ciclospora sp.
ETAPAS
MATERIAIS NECESSÁRIOS
- Amostra
- Água destilada
- Formalina a 7,5%;
- Pipetas de 10mL
- Tubos de centrífuga de 15mL;
- Rolhas ajustáveis ao tubo, de borracha;
- Éter etílico P.A.
- Cotonete ou SWAB (não precisa ser estéril)
- Centrífuga de bancada;
- Lâmina, lamínula, lugol;
- Microscópio Óptico.
2
Filtrar a suspensão através de gaze dobrada quatro vezes, e receber o filtrado em um tubo cônico de centrífuga de 15mL;
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1
Colocar 1 ou 2g de fezes coletadas de várias partes do bolo fecal em frasco contendo 10ml de água corrente ou solução salina a 0,85%;
4
Decantar o sobrenadante e adicionar 1 a 2mL de água corrente ou solução salina a 0,8 5% a o sedimento antes de ressuspendê-lo. Completar com água corrente (ou solução salina a 0,85%) 2/3 do volume do tubo. Agitar e centrifugar (1500rpm por 1 min).
5
Repita a etapa 4, até que o sobre nadante se apresente relativamente claro.
6
Depois que o último sobrenadante é decanta do, ressuspender o sedimento com 1 a 2mL de formalina a 10% (d ar preferência à solução tamponada de formalina a 10% , pH neutro). Completar o volume da suspensão e m 10mL com formalina a 10%. Deixar em repouso em repouso durante 5 minutos.
9
Afrouxar e separar o tampão de detritos das paredes do tubo com um estilete fino e c om cuidado decantar as três camadas superiores. Limpar com swab de algodão as paredes do tubo, removendo os detritos remanescentes;
10
Uma pequena quantidade de líquido que permanece nas paredes d o tubo escorre para o fundo junto ao sedimento.
8
Centrifugar (1500rpm por 1 min). Quatro camadas se formarão: (1) sedimento no fundo d o tubo contendo os parasitos, (2) camada de formalina, (3) tampão de detritos fecais, e (4) camada de éter na superfície;
11
Misturar o líquido e o sedimento, preparando as lâminas para a pesquisa de ovos, lavas e cistos.
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7
Adicionar 3ml de é ter ou acetado de etila, fechar o tubo e agitar vigorosamente, na posição invertida, por 30 minutos. Remover a tampa com cuidado.
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