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ANALIZADORES DE QUIMIOLUMINISCENCIA - Coggle Diagram
ANALIZADORES DE QUIMIOLUMINISCENCIA
QUIMIOLUMINISCENCIA
Es la emisión de luz producida en ciertas reacciones químicas de oxidación
La mayoria de las reacciones quimiluminiscente son de oxidación debido a que la producción
Para detectar un marcado quimiluminiscente se usa una amplia variedad de luminómetros que miden la emisión de luz.
En ellos se determinan drogas, hormonas, marcadores tumorales y otras proteínas.
ELECTROQUIMIOLUMINISCENCIA
La emisión de luz se inicia electrónicamente al aplicar un voltaje a la solución de la reacción, eliminando los problemas relacionados con la adición y mezcla del reactivo
Un tipo especial de inmunoanálisis de luminiscencia es el de la electroquimioluminiscencia, en el que la luminiscencia se genera por la oxidación de un compuesto marcador de tris de rutenio en la superficie de un electrodo
Tienen la gran ventaja de que su límite de detección es extremadamente bajo, inferior a 10’ ‘^ moles, y un intervalo de medida lineal de varios órdenes de magnitud.
FUNDAMENTOS DE LA QUIMILUMINISCENCIA
La producción total de luz está directamente relacionada con la cantidad de luz
emitida y, consecuentemente, es proporcional a la concentración de la especie concreta.
Una de las ventajas más importantes de la Quimiluminiscencia (QL) como técnica analítica es la simplicidad de la instrumentación
La función del compartimento es mantener la mezcla de reactivo y muestra, a una temperatura adecuada y en completa oscuridad a fin de aislar el detector de la luz externa.
En las técnicas de QL, una vez mezclados los reactivos y la muestra comienza la reacción quimioluminiscente y la intensidad de la emisión que se está produciendo, disminuye una vez que los reactantes se han agotado.
INTRODUCCION DE LA MUESTRA Y LOS REACTIVOS
MEZCLA DE REACTIVOS Y LA MUESTRA
En estos casos, se registra la curva completa de intensidad de emisión de QL en función del tiempo de reacción.
Esta técnica se usa en reacciones selectivas en disolución que muestran un alto rendimiento cuántico o un largo tiempo de emisión, como las reacciones bioluminiscentes, el inmunoensayo quimioluminiscente o ensayos de ácidos nucleicos.
Se produce por la fuerza de la inyección, aunque a veces, se puede utilizar un agitador magnético.
Como desventajas de esta técnica destacan el alto consumo de reactivo, el hecho de que no se obtenga ninguna información cinética y que solamente una pequeña porción de la intensidad de QL total es la que se mide cuando las reacciones son lentas.
CELULA DE REACCION
Es una variable muy crítica porque tanto en los métodos estáticos como los de flujos, la magnitud de la intensidad de QL es proporcional al volumen de la célula.
Con objeto de reducir la dispersión de la muestra, generalmente la válvula de inyección y la célula se deben colocar tan cerca una de otra como sea posible.
Va depender de que la reacción de QL se lleve a cabo en fase líquida, sólida o gaseosa, siendo un requerimiento esencial para su diseño que el máximo de intensidad se produzca cuando la mezcla analito-reactivo quimioluminiscente esté frente al detector.
DETECTOR
Debe ser sensible al menos en la región espectral de 400-600 nm, idealmente en la región completa del visible
La señal registrada por el detector debe estar relacionada directamente con la intensidad de luz que ha llegado a él, idealmente directamente proporcional en todo el rango de sensibilidad requerido.
Debe ser capaz de detectar una señal luminosa de varios órdenes de magnitud de intensidad
La velocidad de respuesta del detector debe ser más rápida que la velocidad de la reacción de QL, si no, la señal será una versión distorsionada de la señal original.
ACONDICIONAMIENTO DE LA SEÑAL, MANIPULACION Y LECTURA
A menudo, después de la amplificación del voltaje, la señal de salida de los transductores analógicos se convierte a digital, porque en modo digital es posible tratar la señal con métodos digitales muy exactos o con un programa en un microordenador.
El uso de ordenadores que controlan los instrumentos en QL, hace posible el control de los parámetros instrumentales de forma fácil, a través del teclado del ordenador y el almacenamiento de la respuesta analítica en la memoria del mismo para una posterior manipulación.
La corriente fotoanódica procedente del fotomultiplicador es convertida en primer lugar en voltaje con un amplificador operacional en la configuración corriente-a-voltaje.