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Electrophorèse - Coggle Diagram

- - - - c' est une électrophorèse horizontale
    - - sépare les molécules selon le rapport charge masse : en effet elle conjugue l 'effet de filtration sur gel et la mobilité électrophorétique . Elle utilise deux types de matériaux : agarose ou le polyacrylamide
      - exemple : électrophorèse des acides nucléiques sur gel d 'agarose qui sépare les fragments d ' ADN suivant leur taille : effet filtration sur gel.
        pour déterminer la taille des fragments d ' ADN on utilise des marqueurs appropriés contenant des fragments d ADN de taille connues ,on trace une droite dont l ' axe des abscisses représente log de la masse molaire des marqueurs de taille et l axe des ordonnées représente ,la mobilité relative
      - exemple : électrophorèse sur gel polyacrylamide (PAGE)
        
        Native PAGE ( électrophorèse native , linéaire ,gradient)
        
        réalisée en absence de tout agent dénaturant ( urée , SDS, ); les molécules sont séparées dans leur état natif ( charge , conforamtion , molécules oligomériques )
        
        IEF PAGE ( focalisation isoélectrique )
        
        C ' est une électrophorèse qui repose sur l 'établissement d 'un gradient de ph stable dans lequel pourrant se déplacer les protéines soumises à un champs électrique , arrivées au ph correspondant à leur phi ,les protéines s 'arrêteront : il y a focalisation . Le gradient de ph peut être obtenu soit au moyen d 'ampholine ou imobiline; la matrice peut être de l 'agarose ou gel polyacrylamide .
        
        fixation et détection
        
        par absorption de lumière ( coloration) soit au bleu de coomassie ou au nitrate d 'argent
        
        SDS PAGE ( électrophorèse dénaturante)
        
        western Blot ou imunoblot : une méthode de purification des protéines qui permet de détecter la présence d ' une protéine à des concentrations faibles ou dans un mélange complexe parmi des milliers d 'autres protéines , elle met en jeu deux anticorps le premier se fixe les sites de la protéine pour lesquels il a une grande affinité et le deuxième anticorps se dirige contre les régions constantes de l 'anticorps primaire , celui ci est couplée à un système de révélation tel qu une enzyme ou fluorophore , qui en présence de son substrat produit un composé luminescent et l 'intensité de lumière émise est proportionnelle à la quantité de protéines spécifiques présentes dans la membrane .
        
        2D PAGE ( électrophorèse bidimensionnelle)
        
        principe
        
        repose sur la combinaison de deux électrophorèses : IEF et SDS-PAGE , en effet la première dimension c ' est une séparation selon le phi et la deuxième dimension c ' est une séparation selon la masse
        
        révélation
        
        révélation non spécifique : bleu de coomassie ou nitrate d 'argent
        
        révélation spécifique par autoradiographie ou par western Blot