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USO DE LOS CULTIVOS CELULARES PARA CRIBADO DE FÁRMACO - Coggle Diagram
USO DE LOS CULTIVOS CELULARES PARA CRIBADO DE FÁRMACO
VENTAJAS Y LIMITACIONES DE LOS CULTIVOS CELULARES PARA EL CRIBADO DE FÁRMACOS
Ventajas
Son
Control de medio extracelular
Posible controlar ph, temperatura, humedad ...
Caracterización y homongeneidad de la muestra
Las líneas celulares son homogéneas
Disminución del gasto
Se necesitan pequeñas concentraciones del fármaco
Cuestiones éticas
Permite reducir el uso de animales de experimentación
Menor duración del ensayo
Rapidez en la obtención de resultados
Limitaciones
Son
Excesiva sensibilidad
Crecimiento lento de las células y contaminantes que crecen rápido, pudiendo matar a las células
Límite de producción
Se requieren instalaciones tipo industrial
Inestabilidad
Muchas lineas celulares son inestables que afecta a la velocidad de crecimiento y a su capacidad de diferenciación
Validación de modelo
Terminan perdiendo características diferenciales por desdiferenciación
APLICACIONES DE LOS CULTIVOS CELULARES PARA EL CRIBADO DE FÁRMACOS
¿Qué son las técnicas in vitro para el cribado de fármacos?
Son procedimientos para mantener vivas la células, tejidos, órganos o partes de estos fuera del organismo en un medio de cultivo
Los cultivos celulares
Como dianas terapéuticas es la principal vía para iniciar la caracterización in vitro
Cultivos organotípicos
Están formados por parte de un tejido u órgano, depositado sobre un medio de cultivo, en el que se mantienen las relaciones estructurales y funcionales entre las células
Inconveniente
La estructura 3D dificulta la llegada de los nutrientes a todas las células
¿Que es un cultivo celular en 3D?
Es un cultivo en el que las células pueden crecer e interactuar entre ellas en tres dimensiones, simulando condiciones reales
Comparación
Cultivos 3D
Estos son
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Cultivos 2D
Ventajas
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Inconvenientes
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Estos son
Cultivos celulares
Están formados por células dispersas en un medio de cultivo, perdiéndose las conexiones químicas y mecánicas entre ellas
Primarios
Las células proceden directamente de tejidos u órganos
Secundarios
Las células proceden de un cultivo celular primarios
Inconveniente
Pérdida de propiedades morfológicas y bioquímicas
Pueden ser
ENSAYOS DE ACTIVIDAD ANTIFLAMATORIA
Se usan
Cultivos celulares para determinar la actividad antiinflamatoria de un fármaco
Se basan
En la medición de la viabilidad celular, el grado de inhibición y la detección de citoquinas antiinflamatorias (mediante métodos ELISA)
PRINCIPIOS QUE ORIENTAN LAS METODOLOGIAS EMPLEADAS EN LA CARACTERIZACIÓN DE DIANAS TERAPÉUTICAS
¿Qué son las dianas terapéuticas?
Son moléculas localizadas en cualquier parte de la célula, que reconocen el fármaco se unen a él y esto provoca un efecto farmacológico.
Por ejemplo
Proteínas, azucares, lípidos o ADN/ARN
Existen
600-1500 potenciales dianas terapéuticas
Solo
Se utilizan 500 dianas terapéuticas en los fármacos existentes
ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD MEDIANTE CULTIVOS CELULARES PRIMARIOS Y TUMORALES
¿Qué son los ensayos de citotoxicidad?
Técnicas que evalúan las alteraciones en la función celular por efecto tóxico de sustancias químicas
Aplicaciones en farmacología
Estudio de agentes anticancerígenos en líneas celulares
Son
ensayos que miden la viabilidad y supervivencia tras el fármaco
Baratos, cuantificables y reproducibles
Empleados diferentes métodos como tinciones celulares
Posibles evaluar la concentración máxima no tóxica de un compuesto y concentraciones letales
Las principales técnicas empleadas
Son
Ensayo de captación de rojo neutro
Se basa en
Determinar la liberación del colorante al medio debido a la pérdida de viabilidad celular causada por el compuesto en estudio.
Se observa que
Las células viables podrán retener el colorante y las no viables lo expulsaran al medio, cuanto mayor colorante tenga el medio menor viabilidad y mayor citotoxicidad
Ensayo de enlazamiento al azul kenacid
Se basa en
Determinar la cantidad de azul de Kenacid, el colorante es afín a proteínas celulares, por lo que a mayor cantidad o concentración de colorante mayor viabilidad y menor citotoxicidad
Se observa que
Las células que se tiñen son viables y a mayor numero de celulas teñidas mayor viabilidad y menor citotoxicidad
Ensayo de reducción del MTT
Se basa en
Determina la capacidad de las células para reducir (mediante succínico-DH mitocondriales) el MTT a formazán en un indicador de viabilidad celular.
Se observa que
A mayor concentración de formazán, mayor viabilidad celular y menos toxicidad