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Sequenciamento de DNA - Coggle Diagram

- - - - Uma molécula do DNA que será sequenciado
      - Primer
      - DNA polimerase
      - dATP,dCTP,dGTP,dTTP
      - marcação radioativa ou por corante o didesoxinucleotídeo
      - Adição do primer ou iniciador na sequência desconhecida
      - Enzima DNA polimerase adiciona bases livres no DNA filamentar
      - Ocorrem 4 reações diferentes, de acordo com os didesoxi marcados
        
        São gerados fragmentos que podem ser separados por eletroforese
        
        A posição dos fragmentos no gel ocorre devido a radioatividade do marcador
    - - Preciso separar as fitas que diferem em extensão por apenas um
        nucleotídeo
        
        Géis desnaturantes (uréia e aquecimento a 60ºC)
        
        leitura máxima de 400 nucleotídeos
  - - - marcar radioativamente o DNA alvo
      - Separar as duas cadeias de DNA
      - Distribuir em 4 tubos
      - O passo seguinte é idêntico ao método de Sanger
- - - - cascata enzimática para detectar o processo de amplificação do DNA por meio da liberação de pirofosfato.
      - baseado em detectar a atividade da DNA polimerase com outra enzima quimioluminescente (LUCIFERASE).
      - Etapas