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Objetivo 63 Parte 1, We used NAC as a positive control because the…

- - - - No trabalho Behavioral, inflammatory and neurochemical disturbances in LPS and
        UCMS-induced mouse models of depression os autores utilizam hibridização para TNF-alfa, IL-1B e IL-6
  - - - BrdU (injeção IP uma semana antes da eutanásia) [KUHN e COOPER-KUHN, 2007]
      - Luxol fast blue
        
        LFB-PAS staining showed no demyelination in the examined brain regions of stressed rats (data not shown) (425*).
        
        Não vou avaliar mielina
      - Citocinas pró-inflamatórias
        
        TNF-α, IL-1β, IL-6, IFN-y, IL-17
      - c-Fos
      - CD200
        
        Marcador de micróglias quiescentes
    - - Radicais livres
        
        O2•
      - Nerve growth factors
      - Espinhos dendríticos
    - - Sinapsin 1 [40]
        
        detectam vesículas neurosecretórias, localizadas primariamente nas sinapses, além de marcarem fracamente os corpos celulares [2].
        
        Tem estudos no UCMS com esse marcador?
        
        Sim! Por exemplo: Mifepristone Repairs Region-Dependent Alteration of Synapsin I in Hippocampus in Rat Model of Depression
      - Microtubule-associated protein 2 [40]
      - Doublecortina [MIZUKI et al., 2014]
        
        Neurogênese
      - AQP-4
        
        Presente nos endfeets dos astrócitos
      - TUNEL
      - Fluoro-Jade
      - Neurotransmissores
        
        Catecolaminas
        
        Dopamina
        
        Serotonina
        
        O mercado de antidepressivos foi de 11,6 bilhões de dolares em 2017 [299-Mordor-Intelligence, 2017], sendo que os moduladores serotoninérgicos representam 90% do mercado [299-Artigas, 2013].
      - CD3
        
        Células T
        
        Já que ocorre o recrutamento dessas células para o SNC, sendo mediado pelas micróglias
      - CD20
        
        Células B
      - MPB
      - Fatores neurotróficos
        
        BDNF
      - Como as micróglias regulam os elementos pré- e pós-sinápticos, há algum marcador interessante?
      - Pericitos
        
        As a component of the BBB, the main function of pericytes are to regulate influx and outflux of substances and under inflammatory conditions they migrate, secrete cytokines and metalloproteases to aid extravasation of leukocytes (426-Rustenhoven et al., 2017).
      - MHC-II
        
        https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29697861/
      - Ki-67
        
        Dupla marcação com Iba-1
      - Carbonic anhydrase II (CAII) [363-Ghandour et al., 1980]
        
        Oligodendrócitos
      - NACHT
        
        the role of Nucleotide-binding oligomerization domain (NACHT), Leucine-rich repeat (LRR), and Pyrin domation (PYD) domains-containing protein 3 (NLRP3) inflammasome-dependent IL-1β has emerged as a novel contributor to depressive disorders (299-Alcocer-Gomez and Cordero, 2014; Kaufmann et al., 2017).
      - LRR
      - PYD
      - NLRP3
      - P2RY12
        
        Marcador do estado homeostático de micróglias
        
        Acho que não faz sentido usar esses marcadores de micróglias quiescentes, pois vou inativá-las.
    - - Caspase-3
      - Vimentina
    - - Marcadores inflamatórios (TSPO, CD206, CD86, iNOS, Arg-1).
        
        Qual técnica?
      - Marcadores celulares (c-Fos e MAP-2)
        
        Qual técnica?
  - - - Hipotálamo ventromedial
        
        In the hypothalamus, measurement was focused on the ventromedial hypothalamus (VMH). In a previous study (425-36) this subregion of the hypothalamus was shown to respond to chronic stress by increasing the expression of some proinflammatory cytokines.
    - - The corpus callosum, internal capsule, and external capsule are important white matter structures, which contain no neurons but do contain neuroglial cells, so are suitable for checking white matter status as reported in previous studies (425-30 a 32). The caudate putamen (CPU) is a brain region occupied mainly with myelinated fibers that can be readily visualized histochemically and immunohistochemically.
    - - Córtex somatosensorial
  - - - Qual nível do bregma?
  - - - Artigo 305
        
        Os autores nesse trabalho abordam como alguns fatores, como dieta, padrões de sono, atividade física e microbiota, podem afetar as células da micróglia.
  - - - P21
        
        P23-P26
        
        Linha de base dos testes comportamentais
        
        Não farei linha de base pois não faz sentido, já que os animais serão muito jovens e o teste é realizado depois de já ter passado por muitas fases do desenvolvimento.
        
        P27
        
        P28-P58
        
        Protocolo de ambiente enriquecido
        
        (...) such as plastic tubes in which mice could climb and use to navigate through the cage [483].
        
        As rodinhas e as escadinhas permitem que haja um estímulo da atividade física voluntária dos ratos [488*].
        
        Para justificar o uso do AE, procurar problemas associados aos antidepressivos. Nesse trabalho (488) têm alguns, e é fácil de encontrar na literatura.
        
        Outro ponto para justificar o uso do AE são dados em medicina mostrando que um ambiente que promove bem estar tem efeitos potentes, como em [489-Bowler e Pullin, 2010].
        
        P60 - Testes comportamentais
        
        P65 - Eutanásia
        
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        Protocolo de estresse crônico moderado e imprevisível
        
        Os protocolos com estresse crônico duram cerca de 2 semanas. Seria um argumento a mais para utilizar o UCMS (que já é outro modelo, pois normalmente usam modelo de derrota social) e crônico mesmo (> 30 dias), a fim de verificar a participação a longo prazo das micróglias.
        
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        Um grupo de camundongos poderiam ser eutanasiados no meio do protocolo para garantir a depleção microglial?
        
        É realmente importante usar o desafio com estresse agudo?
        
        OK! Foi removido.
        
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        Depleção microglial
        
        Pode ser injetado IP, no sentido que em outros trabalhos, autores usam outras drogas administradas por IP >= 28 dias (ou seja, IP não é o problema)
        
        Ao menos na ração, é possível fornecer PLX5622 por mais de um mês, como mostrado em CSF1R inhibitor PLX5622 and environmental enrichment additively
        improve metabolic outcomes in middle-aged female mice
        
        Tem como nós usarmos na ração?
        
        OK
        
        Posso colocar no trabalho que apesar de muitos artigos demonstrarem que a redução da atividade microglial desempenha uma melhora cognitiva, os tratamentos não são feitos cronicamente.
        
        Qual o período máximo de administração de PLX5622 encontrado na literatura? As vezes injetar durante 30 dias pode matar os bichos.
        
        OK! Tem trabalhos utilizando por 30 dias.
        
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        Desmame
        
        Avaliação do peso corpóreo diariamente
    - - Obter os animais
        
        P21
        
        P22~P52
        
        P53 - Teste de preferência por sacarose
        
        P55 - Teste de suspensão pela cauda
        
        P56 - EPM
        
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        Procurar a ordem e o embasamento científico que se costuma ver na literatura.
        
        Protocolo de estresse crônico moderado e imprevisível
        
        Depleção microglial
        
        Protocolo de ambiente enriquecido
        
        Começar aos 22 dias é usual nos trabalhos com UCMS?
        
        Desmame
        
        Avaliação do peso corpóreo semanalmente
        
        Swiss
        
        Alterar em todos os campos na CEUA
        
        KO?
  - - - Porque o objetivo é mostrar como as células da micróglia regulam a redução do comportamento ansioso/depressivo provocado pelo modelo de estresse crônico. O ambiente enriquecido foi escolhido por ser um tratamento não farmacológico bastante eficiente quanto ao efeito ansiolítico e antidepressivo.
        
        A literatura demonstra que as micróglias possuem uma função muito mais fina no controle da homeostase neural do que simplesmente liberando mediadores pró-inflamatórios. O fenótipo M2, por exemplo, é essencial para a restauração da integridade neural após protocolos de estresse (pois inativando as micróglias os efeitos negativos persistem).
        
        Os projetos com PLX5662 não usam UCMS, e o modelo usado normalmente (derrota social) possui apenas 14 dias.
- - - - Trabalhos de Charlotte Madore
        
        Microglia, Lifestyle Stress, and Neurodegeneration
        
        As micróglias desempenham papel chave no desenvolvimento do estresse e em doenças neurodegenerativas
      - Aqui deveria ser colocado um trabalho em que os autores fizeram o UCMS, e bloquearam os efeitos das micróglias, demonstrando que o fenótipo M2 é necessário para a proteção contra o estresse. Mas não encontrei esse artigo, então vou procurar outros
        
        Como não encontrei, vou procurar ao menos um trabalho demonstrando o papel protetivo das micróglias no estresse.
        
        Microglia Polarization and Endoplasmic Reticulum Stress in Chronic Social Defeat Stress Induced Depression Mouse
        
        As micróglias M2 protegem os neurônios, entre os outros pontos citados no trabalho, também pela expressão de HO-1
- - - - Montar material main (dentro de Neurohistologia das Células Gliais)
        
        OK
    - - Montar material main
        
        OK
    - - Montar material main
        
        Procurar dois artigos, dentro da minha lista de artigos baixados, para resumir sobre o EA
        
        Artigo 455
        
        OK
        
        Artigo 467
        
        OK
        
        Fichar o material GOURLART, Carolina de Souza. Enriquecimento ambiental, ansiedade, cognição e neurogênese hipocampal.
        
        OK
        
        Participação das células microgliais na interação entre o modelo de estresse crônico moderado e imprevisível associado ao ambiente enriquecido
        
        Utilizar o arquivo Projeto de Submissão para FAPESP
        
        Manter um correspondente no Anki
        
        Título: 1.3 Participação das micróglias na interação entre o UCMS e o AE
        
        Introdução sobre as micróglias
        
        Participação das micróglias no estresse crônico
        
        Pesquisar nos meus arquivos (neurohistologia das células gliais; passar para o principal, etc.)
        
        Há estudos com micróglia vs UCMS?
        
        Sim! Incluindo aquele estudo em que os autores mostram que o fenótipo M2 é fundamental para a restauração da normalidade.
        
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    - - OK!
    - - Análise morfológica
        
        Vou estudar os núcleos responsivos ao estresse ao nível do Bregma -1.5. Quais regiões são essas?
        
        Entrar no atlas e procurar
        
        Citar mais duas
        
        Procurar 5 artigos que avaliam estresse crônico, seja com métodos histológicos ou Western Blot, ELISA, etc., e se eles costumam estudar mais alguma outra região (sim, só não me lembro) fora essas três
        
        Ao nível escolhido, serão estudados principalmente o (1) hipocampo e a (2) amígdala. Além disso, podem ser avaliadas regiões como (3) hipotálamo, (4) corpo estriado, (5) putâmen, etc.
        
        Identifiquei: hipocampo, hipotálamo, amígdala.
        
        IHC/IF
        
        Iba-1
        
        GFAP
        
        NeuN
        
        CD68
        
        Lipofuscina
        
        OK
      - Testes comportamentais
        
        Labirinto em cruz elevado
        
        Caixa claro-escuro
        
        Campo aberto
        
        Teste de reconhecimento de objetos
        
        OK
      - PLX5622
        
        Marquei que usaria na 3º e 4 º semana. Faz sentido?
        
        1-Ler três artigos que estudam PLX5622 + estresse/ambiente enriquecido ou ainda outra doença.
        
        Artigo 483
        
        Na ração
        
        Plexxicon
        
        14 dias antes do estresse crônico
        
        Artigo 484
        
        Antes e durante os 14 dias de estresse crônico
        
        Artigo 485
        
        2- Ou seja, não faz sentido a administração depois do protocolo de estresse, e também até agora os outros utilizaram o produto misturado na ração.
        
        Existe algum trabalho que faz injeções IP com a PLX5622?
        
        Pesquisar no Google Acadêmico
        
        "plx5622 intraperitoneal"
        
        Sim!
        
        Astrocytic response to neural injury is larger during development than inadulthood and is not predicated upon the presence of microglia
        
        OK
- - - - Difícil definir um tempo assim. Já me perdi bastante e nem lembrava dessas "duas horas". Mas ainda falta, realmente, passar conteúdo desses materiais para o Projeto de Submissão para FAPESP.docx.
        
        Histórico
    - - Este parece ser o teste mais delicado de todos. Eu fichei um artigo muito interessante em que os autores realizam o TPS dentro do próprio protocolo de UCMS. Vou fichá-lo e adicionar no material que criei recentemente - Testes comportamentais.docx.
        
        Já perdi o material... então fichar novamente.
        
        27/02/2022 Arquivo totalmente fichado e presente em Artigos sobre testes comportamentais.docx
        
        O artigo fichado (Liu et al. 2018*) será a base para meu TPS. Sendo assim, montar meu cronograma apenas com essa fonte. Depois, aperfeiçoar com mais artigos.
        
        Provavelmente não é possível que confeccionemos o aparato de TPS no laboratório. Então procurar protocolos em que o teste é realizado nas próprias gaiolas.
        
        Para o mestrado e outros trabalhos, é possível confeccionar o aparato?
        
        Ler os protocolos de Zhu et al. (2014) e Barbosa et al. (2017) procurando mais detalhes
        
        Barbosa et al. (2017)
        
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        Zhu et al. (2014)
        
        1 more item...
        
        Takatsu-Coleman et al. (2013)
        
        1 more item...
        
        Silva et al. (2018)
        
        1 more item...
        
        O jejum antes do teste, terá duração mesmo de 24 horas?
        
        No artigo de Liu et al. (2018) os animais são privados de água e comida por 24 horas.
        
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        Eu coloquei no projeto privação hídrica/alimentar de 12 horas. Substituir no próximo envio ao CEUA.
        
        Em protocolo de UCMS com 30 dias, os autores realizam apenas uma linha de base? E em que dias?
        
        Pode ser interessante realizar uma por semana, não?
        
        2 more items...
        
        Em protocolo de UCMS com 30 dias, os autores iniciam a adaptação no primeiro dia mesmo?
        
        Em praticamente todos os protocolos lidos a adaptação precede o UCMS. Como no projeto vou deixar os animais em um período de habituação devido ao ambiente enriquecido, aproveitar para deixar com a sacarose.
        
        Histórico
        
        A gente tem sacarose? O Thiago tem?