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MÉTODOS MOLECULARES., BIBLIOGRAFIA, PCR - Coggle Diagram
MÉTODOS MOLECULARES.
SECUENCIACIÓN
Conjunto de métodos y técnicas Bioquímicas para determinar el orden de los nucleótidos en un oligonucleótido de ADN
Sirve para determinar la secuencia exacta de las bases (A,C,G y T)
El método de secuenciación consiste en: en romper las largas cadenas de ADN en muchas piezas pequeñas y utilizar luego uno de los diversos tipos de pruebas analíticas para determinar el orden de las bases de nucleótidos que componen esas piezas.
La secuenciación de bases de ADN lleva la información que una célula necesita para ensamblar proteínas y moléculas de ARN.
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MICROARREGLOS
Son una herramienta de la biología molecular, que permite medir, cuantificar la expresión génica o identificar mutaciones en genes específicos.
Se utiliza ADNc o ADN que se marcan con diferentes colores, para poder diferenciarlas, ya que se analizaran al mismo tiempo.
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Es una tecnología poderosa ,permite analizar diferentes tipos de muestras biológicas (tejidos, proteínas y material genético)
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Etapas del proceso:
- Síntesis y marcado de ADN
complementario (ADNc)
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PCR
PCR Multiplex
También para detectar diferentes patógenos virales, bacterianos y otros en un solo tubo.
Aplicaciones : Puede detectar microorganismos que causan enfermedades de transmisión sexual como : Mycoplasma hominis y Trichomonas vaginales
Ventajas :
- La presencia de controles internos en una PCR multiplex ayuda en la detección de falsos negativos.
- La PCR multiplex es un método rentable y requiere menos tiempo. Con este método se pueden conservar bajas cantidades de molde y costosos reactivos y enzima polimerasa.
- La cuantificación de la plantilla es posible comparándola con una plantilla estándar comparando el número de ciclos y la inhibición mínima de la duplicación del producto.
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Sirve para detectar deleciones, polimorfismos, mutaciones
Técnica que se utiliza para amplificar múltiples secuencias diana en una sola reacción de PCR utilizando múltiples conjuntos de cebadores.
PCR TIEMPO REAL
Es una modalidad del PCR donde la acumulación de DNA amplificado es detectado y cuantificado a medida que la reacción avanza.
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PCR ANIDADA
Consigue amplificar muestras mínimas de ADN a miles de millones de fragmentos, ya que se realiza en 2 PCR consecutivas.
Proceso
1.- En la primera ronda se amplifica de manera convencional con los cebadores mas externos a la region que se desea amplificar.
2.-En el producto del primer PCR en la segunda ronda lo utiliza en los cebadores internos a la región previamente amplificada.
3.-La sensibilidad de la PCR anidada es extremadamente alta debido al proceso de amplificación dual.
La desventaja de la reacción es el alto riesgo de contaminación cruzada, durante la transferencia de productos de amplificación de la primera ronda a un segundo tubo de reacción.
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