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FRACCIONAMIENTO CELULAR Y CLOROPLASTOS - Coggle Diagram
FRACCIONAMIENTO
CELULAR Y CLOROPLASTOS
¿Qué es?
Forma de purificación de las estructuras subcelulares liberando los contenidos rompiendo la membrana plasmática y la pared celular.
Debe ser en un medio isotónico para evitar que las organelos se rompan o se deshidraten.
Intenta reagrupar las partículas celulares tras haberlas separado y se da en 3 etapas (homogeneización, filtración y purificación):
Se pueden emplear enzimas marcadoras para detectar la presencia o ausencia del organelo especifico.
Aplicaciones
Análisis bioquímico de los organelos (componentes)
Estudio de la fisiología de los organelos
Análisis de las funciones celulares:
síntesis de biomoléculas.
transporte de solutos.
etc.
Homogeneización
Método físico de disgregación (rotura) vigorosa de las células tras la aplicación de una fuerza mecánica que rompe los tejidos y las membranas. Genera una emulsión
Empleando:
Émbolos
Cuchillas
Pistones
Uso de una solución tampón para regular el pH del medio isotónico para detener el daño osmótico.
Temperatura muy baja que evita daños enzimáticos.
Centrifugación
Separación de mezclas en donde hay sólidos y líquidos o bien, líquidos inmiscibles, por el movimiento rotatorio de las partículas que son impulsadas por una fuerza centrífuga que las separa de su eje de rotación de forma rápida.
Diferencial: aprovecha la diferencia en densidades de las moléculas (debe ser grande).
Las sustancias se concentran en soluciones de sales de cesio o sacarosa conforme la densidad de flotabilidad de las partículas.
Factores que influyen en
Homogeneización
Medio: Si no es isotónico se puede presentar daño por condiciones osmóticas.
Temperatura: Cuando la temperatura excede mucho más arriba del 0 se presenta el daño del tejido por acción enzimática (autolisis).
Instrumentos empleados: Si los instrumentos no son adecuados pueden dañar los organelos, así mismo distintos instrumentos pueden romper el tejido en tamaños diferentes.
Tipo de molécula de interés: A veces se requieren condiciones y medios específicos para la obtención de un organelo o molécula específica.
Centrifugación
Densidad de las muestras y la solución: Pueden separarse fácilmente o con dificultad debido a sus propiedades físicas.
Temperatura: La muestra puede presentar menor fluidez a baja temperatura debido a sus componentes.
Velocidad de rotación y tiempo: Para obtener ciertos organelos o partículas es necesario modular la velocidad, pueden obtenerse a mayor o a menor en un lapso de tiempo corto o prolongado, afecta la obtención de productos.
Reacción de Hill
En 1937 Robert Hill encontró que en presencia de luz los tilacoides de los cloroplastos (sacos captadores de luz) aislados son capaces de reducir varios compuestos que actuarían como oxidantes en lugar del CO2
En presencia de un aceptor artificial de electrones como el ferrocianuro, se desprende O2 , el ferrocianuro se reduce, no existe producción de NADPH o plastocianina.
Cuando el agua se oxida a oxígeno en NADP se reduce y se forma ATP (reacciones de los tilacoides).
La fijación y reducción del carbono se producen en el estroma.
El proceso por el cual las plantas producen oxígeno es independiente del proceso que convierte el dióxido de carbono en azúcares.
Reacción de Hill con 2,6-Diclorofenolindofenol.
El 2,6-Diclorofenolindofenol es un colorante que tras ser oxidado presenta una coloración azul y si se reduce es incoloro.
Sus moléculas interceptan los electrones en la
cadena fotosintética evitando que se dirijan al fotosistema II donante primario
La pérdida de color señala que la reacción se lleva a cabo en una fase dependiente de la luz
El flujo de los electrones se cuantifica con un espectrofotómetro.