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Criopreservación de células animales - Coggle Diagram
Criopreservación de células animales
(1) Tripsinización y conteo celular
Retirar de incubadora con cuidado y observar cambios en coloración
Llevar frasco al microscopio
objetivo 10X
Anotar morfología y tipo de crecimiento
Tripsinizar el medio
Centrifugar
Retirar sobrenadante
Agregar medio de cultivo para resuspender
2-4mL
Realizar conteo celular en cámara de Neubauer con azul de triptano
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800rpm durante 5 minutos a 4ºC
(2) Preparación del medio de congelamiento
Etiquetar crioviales
Realizar cálculos y preparar condiciones de esterilidad del medio de congelación
20 crioviales de cada línea celular
DMSO al 10% + medio DMEM suplementado con 10% SBF, 4.5mM de glutamina y 100uL en 100mL de antibiótico
Esterilizar por filtración
Resuspender pellet en el medio de criopreservación
Abrir viales y depositar alícuotas de 1mL de la suspensión en cada criovial
Verificar cierre hermético y colocarlas dentro de una caja de cartón
Colocar viables al centro y cerrar caja
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