Elektroforesis isozim dilakukan dengan elektroforesis gel poliakrilamida vertikal diikuti dengan metode David–Ornstein (Seido 1993). Daun dihomogenisasi dalam buffer ekstraksi yang dimodifikasi dan disentrifugasi pada 15.000 rpm selama 15 menit pada suhu 4 ° C. Supernatan dimuat ke gel slab vertikal poliakrilamida (Sigma Inc., USA) dan dielektroforesis dalam penangas air pada 4 ° C, 220 V, dan 200 mA selama sekitar 3 jam. Setelah elektroforesis, gel diwarnai menggunakan larutan pewarnaan masing-masing sistem enzim. Analisis pendahuluan menyaring enam sistem enzim, yaitu peroksidase (PRX), shikimate dehydrogenase (SHD), esterase (EST), acid phosphatase (ACP), diaphorase (DIA), dan glutamat dehydrogenase (GDH) (data tidak dipublikasikan). Hanya tiga sistem enzim, yaitu, PRX (EC 1.11.1.17.), EST (EC 3.1.1.), dan ACP (EC 3.1.3.2.), menghasilkan pita polimorfik yang konsisten, dan oleh karena itu, diterapkan pada analisis genetik untuk semua sampel.