Amplifikasi ISSR dilakukan dalam volume akhir 30 nl yang mengandung total DNA genom 10-20 ng, masing-masing 200 nM dNTP, primer 0,25 nM, 3,0 nM MgCl2, 1 unit Taq DNA polimerase (Fermentas, USA) dan 1 x buffer PCR (juga dari Fermentas). Reaksi amplifikasi dilakukan dalam thermocycler (Techne, UK) dengan ketentuan sebagai berikut: tahap denaturasi awal pada 94 C selama 3 menit, 45 siklus 94 C selama 45 detik, 52 C selama 45 detik dan 72 C selama 10 menit. Fragmen amplifikasi dipisahkan dalam gel agarosa 1,7% dan ukuran pita amplifikasi diperkirakan menggunakan penanda GeneRuler 100bp DNA Ladder Plus (Fermentas). Reproduksibilitas amplifikasi ISSR dipastikan di seluruh percobaan dengan mengulangi reaksi PCR untuk setiap sampel tanaman setidaknya dua kali dan menggunakan sampel yang tumpang tindih sebagai referensi dalam percobaan amplifikasi yang berurutan. Hanya profil ISSR yang dapat direproduksi dan benar-benar dapat dinilai yang dianalisis lebih lanjut.