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Pruebas de evaluación genotóxica, image, image, image, image, image, image…

- - - - Posee un ciclo de vida haploide con 7 cromosomas que hacen que un evento mutacional sea evidente en el fenotipo por lo que es muy útil para el estudio de mutaciones puntuales y de tipo epigenético.
        
        En esta, se revierte la dependencia a la adenina en el medio de cepas mutantes 70007 y 38701 con la adición de un xenobiótico a evaluar. La cepa 38701 presenta un coeficiente de reversión espontánea muy bajo por lo que ayuda a determinar mutágenos débiles.
    - - En su estado diploide tiene 6 cromosomas y permanece más tiempo en fase G2 del ciclo celular, por lo que es útil para estudiar el mecanismo genotóxico de algún agente que se esté probando durante el ciclo celular. .
    - - Tiene 16 cromosomas en su estado diploide por lo que se le pueden inducir mutaciones y estudiarse de manera puntual, estudiar aneuploidía, recombinación mitótica y la pérdida de cromosomas (estudio de efectos por la inducción química durante la división mitótica y meiótica). Pasa más tiempo en la fase G1 del ciclo celular por lo que puede usarse para saber como actúa un genotóxico a lo largo del ciclo celular.
        
        Mutación forward: hay una mutación en un alelo para la síntesis de adenina (cepa D7), se cultiva y forma colonias rojas por la acumulación de un pigmento que es metabolito intermediario de la síntesis de la adenina, pero como no se llega a esta, se visualiza el pigmento. Si al probar un xenobiótico se induce una mutación en estos genes va a originar colonias blancas.
    - - Permite evaluar mutaciones puntuales, aneuploidía y clastogénesis. Forma conidios por lo que es posible evaluar el daño a nivel de células gaméticas.
- - - - Utiliza cepas estándar de Salmonella typhimurium como TA1537, TA1535, TA100, TA98 yTA102, donde la mutación es que no codifican para histidina. Además, se modifican otros parámetros para que la prueba sea más sensible, como hacer modificaciones a la pared para que sea más permeable, modificaciones a sus sistemas de reparación para evitar auto reversiones, uso de fracción microsomal S9 para mimetizar los eventos de biotransformación, entre otros.
      - Utilizan bacterias que sean auxótrofas (no tienen la capacidad de sintetizar alguno de sus nutrientes y por lo tanto, no crecen en medios mínimos). Cuando se coloca en un medio mínimo a un microorganismo auxótrofo con el xenobiótico a estudiar y este prolifera, significa que el xenobiótico tiene la capacidad de hacer una mutación reverse que regresa a este organismo a ser un protótrofo. Así podemos considerar a dicha sustancia como un mutágeno.
  - - - Se basa en mutaciones forward en cepas de Escherichia coli como PQ37, con mutación que las hace deficientes de triptofano, donde se puede evidenciar la mutación mediante color generado a partir de una reacción enzimática donde el triptófano participa. Este proceso actualmente está automatizado.
- - - - Se ha adaptado el uso de células del meristemo apical de Vicia faba y Allium cepa para evaluar aberraciones cromosómicas, intercambio de cromátides hermanas y micronúcleos.
      - En cebada y soja para evaluar mutaciones puntuales como en la ausencia de clorofila.
      - En Arabidopsis thaliana y Tradescantia se puede hacer la prueba de coloración de los pelos estaminales para la evaluación de mutaciones en células germinales: el color cambia de azul a blanco o rosado por mutaciones ocasionadas en los genes responsables del color.
- - - - Ensayo de síntesis no programada de DNA.
        
        Se utilizan hepatocitos para hacer un cultivo primario, se incuban con un xenobiótico, se lavan y se incuban con timidina tritiada, el cual es un marcador de síntesis de DNA que va a evidenciar la síntesis no programada de DNA durante G2, contando la autorradiografía de las células: muestra que hubo un daño a DNA que se corrigió. Actualmente se hace con 5-BrdU y anticuerpos o por citometría.
      - Prueba in vivo de mutación genética de células de mamíferos
        
        Utiliza células CHO (ovario) y V79 (pulmón) de hámster chino. Son HGPRT negativas: les confiere resistencia a la citotoxicidad causada por 6-tioguanina y a 8-azaguanina . Si al agregar un xenobiótico, las células dejaron de proliferar, es porqué el compuesto evaluado las convirtió en HGPRT positivas y perdieron esa resistencia que antes tenían.
      - Intercambio de cromátides hermanas
        
        Permite evaluar si un agente es genotóxico S-dependiente. Se coloca colchicina a las 71 horas de incubación (conservar la estructura de los cromosomas mitóticos metafásicos). Se coloca 5BrdU en el medio para que se introduzca como análogo de la timina y Hoechst 33258 que se una a este. Se genera una fotólisis que hará que los cromosomas queden color rosa claro y se puedan teñir por completo con Giemsa en la primera división (debido a que cada cromátida está mono sustituida con 5-BrdU). Para la segunda división, una cromátide se vera rosa claro y otra teñida con Giemsa: una cromátide mono sustituida y otra di sustituida. Es en esta división donde se cuentan los ICH.
      - Ensayo de micronúcleos in vitro
        
        Cultiva linfocitos de una muestra de sangre periférica expuestas al xenobiótico, se agrega una fuente exógena de activación metabólica de ser necesario. Se agrega citocalasina B para evitar la citocinesis y observar células binucleadas y la posible formación de micronúcleos.