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Aislamiento de Hongos y Morfología colonia, José Alberto Valenzuela Ochoa,…
Aislamiento de Hongos y Morfología colonia
Siembra con asa micológica.
Material
Asa micológica
Medios de Cultivos solidos en caja o tubo
Mechero
Cultivo de un hongo filamentoso.
Procedimiento
1.- Después de esterilizar el asa micológica esta tarda mas enfriar por lo que se recomienda utilizar Agua estéril y sumergirla para acelerar el enfriamiento.
2.- Se destapa la caja que contiene el cultivo y tocamos con el asa la superficie donde se encuentro las estructuras de reproducción.
3.- Se toma la caja a inocular y se coloca en área aséptica exactamente en el medio del cultivo, presionando levemente, posteriormente se cierra el inoculo y se coloca sobre la mesa en posición invertida.
4.- Por ultimo se esteriliza el asa micológica, antes de colocarla en la mesa de trabajo.
Cultivo de Hongos
Para la identificación de agentes micológicos en muestras que contengan queratina, como, piel, uñas o pelo se utiliza la tinción de hidróxido de potasio o KOH al 10%, de igual manera tinciones complementarias como el azul de lactofenol, permite evidenciar estructuras e hongos de color azul en pelo.
Material
Mecheros
Hojas de bisturí
Cubreobjetos y portaobjetos
Solución de KOH al 10% y azul de lactofenol.
Medios de cultivos Sabouraud y Mycosel.
Examen directo
Procedimiento
1.- Encender el mechero.
2.- Rotular las cajas de cultivo y laminas con el nombre del paciente y la fecha del procedimiento.
3.- En un portaobjetos colocar dos gotas de azul de lactofenol y de KOH al 10% en el segundo portaobjetos.
4.- Tomar una pinza y esterilizarla en el mechero y tomar una porción del espécimen de interés.
5.- Mezclar la muestra inicialmente con el Azul de lactofenol y colocar un cubreobjetos.
6.- Se flamean las pinzas y dejar enfriar.
7.- Tomar una muestra del espécimen de interés mezclar la muestra la muestra con el KOH al 10% y colocar un cubreobjetos.
8.- Flamear la muestra para calentarla.
Inoculación de Medios de Cultivos
Con el mechero encendido, usar una hoja de bisturí estéril, para tomar una muestra de interés para inocularla inicialmente, en el medio de cultivo mediante un corte longitudinal profundo en el agar de cultivo sin tocar el fondo.
Llevar los medios a una incubadora en condiciones de obscuridad a temperatura de 20 a 30 grados centígrados.
Monitoreo de Hongos al Aire
Destapando la caja y esperar por una hora
Pasado el tiempo llevarla la incubadora en condiciones de obscuridad a temperatura de unos 20 a 30 grados centígrados.
Identificación de Hongos
Paso 1.- Examen macroscópico de los cultivos.
Una vez transcurrido el tiempo de los especímenes, se debe de realizar una evolución macroscópica.
Se debe de revisar los cultivos por su reverso, de esta manera se deben de reportar características importantes. La presencia o la ausencia de crecimiento, el tamaño de las colonias, color y apariencia.
Una vez realizado el examen anterior, se procederá a evaluar, las mismas características en la parte anterior o anverso. Se debe de evaluar además, si el crecimiento del hongo ocurrió en las zonas de inoculación y si su aspecto es algodonosa, terreo o aterciopelado como el de los hongos filamentosos o cremoso como las levadura.
Paso 2.- Coloración de estructuras de Hongos.
Encender el mechero
En un portaobjetos color dos gotas de azul de lactofenol.
Tomar una pinza estéril y flamearla y dejarla enfriar.
Tomar una cina adhesiva y colocarlos en una de las colonias presentes en el medio, con el fin de captar estructuras del hongo de interés.
Retirar suavemente la cinta y a modo de cubreobjetos, depositarlas sobre una gota de Azul de lactofenol.
Paso 3.- Visualización de Estructuras de Hongos
Tomar las laminas donde previamente se realizo la tinción de lactofenol y se llevan al microscopio para su identificación.
Resultados
Enfocar con el objetivo de 4X y explorar en búsqueda de estructuras de hongos.
Una vez terminado, descartar la muestra en un recipiente de Bioseguridad.
José Alberto Valenzuela Ochoa
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