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Clonación de la topoisomerasa II Mitocondrial de L. mexicana - Coggle…
Clonación de la topoisomerasa II Mitocondrial de
L. mexicana
Aspectos Importantes
Abertura del plásmido(
previamente amplificados
/
primers en una PCR
Verificación: electroforesis de DNA
Obtenido:
bacteria
:arrow_right: extracción
Mini o maxi-prep
DNA recombinante (unión de fragmentos),
Laboratorio
Buscar el gen (LMXM-15-1290)
descargar las secuencias para el 2.
Acceder Addgen
Sección :check:
Sequence Analyzer
:arrow_up: Cargar las secuencias del
paso 1
:check: map and features
:eyes: :computer: determinar las enzimas de restricción a usarse.
:check: Análisis de la secuencuas
Digest, non-cutters
Forward 5``
CGCTCTAGAATGACGGACGCTTCCAAGTATAA
XXX/
XBaI
/
ATG
/TOPIImt5’
Reverse
TGCTGCCCCACATTTTGCTG
GGTGGTGGTGGTGGTGGTG
TAG
AAGCTT
TAAT
Complementaria
ATTA
AAGCTT
CTA
CAACCACCACCACCACCAC
CAGCAAAATGTGGGGCAGCA
XXX/
HindIII
/
CTA
/
HisX6
/TOPIImt3
y para el plásmido
pEMBLyex4
GenBank
enzimas de restricción :scissors: extremos cohesivo :page_with_curl: fragmento con
DNA ligasa
, permiten integrar el gen :red_cross: :scissors: cortar el gen
