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Técnicas de quantificação microbiana - Coggle Diagram
Técnicas de quantificação microbiana
Técnicas
Quantificação direta
Contagem direta ao microscópio
Amostras secas em lâminas coradas
Aumento do contraste entre células e fundo
Amostras líquidas
Lâmina "contador de células de Petroff-Hausser"
Grade quadriculada
Área marcada sobre a superfície de uma lãmina de vidro
Bactérias móveis
Difíceis de serem contadas
Células mortas acabam sendo contadas como vivas
Desvantagem
Concentração de células elevada
Contagem satisfatória
10 milhões de bactérias por mililitro
Vantagem
Tempo de incubação não é requerido
Reservadas onde o tempo é essencial
Contadores Coulter
Contadores de células eletrônicas
Contam o número de células em um volume líquido
Contagem em placas
Determina o tamanho da população bacteriana
Vantagem
Quantificação de células viáveis
Célula viável
Capaz de dividir-se
Células-filhas
Dão origem a uma colônia na placa
Contagem em placa
Cada célula viável cresce e se divide
Colônia e células proporcionais
Desvantagem
Tempo de aparecimento das colônias
24 horas
Número apropriado de colônias
Amostra deve ser diluída
Mais de uma diluição é necessária
Culturas densas
Diluição necessária para plaquear um número contável de colônias
Métodos
Método de Semeadura em profundidade
Volume do inóculo
0,1 - 1mL de diluição bacteriana
Placa de Petri
Meio de cultura fundido
50ºC
Impede a solidificação do ágar
Culturas crescem
Ágar nutriente
Células suspensas no meio nutritivo
Ágar solidificado
Superfície do meio de cultura
Desvantagens
Bactérias sensíveis ao calor
Métodos de diagnóstico
Meio diferencial para observação do aspecto da colônia crescida na superfície do meio
Não pode usar meios opacos
Método de Semeadura por espalhamento
Volume do inóculo
0,1 mL da diluição bacteriana
Superfície do meio de cultura
Espalhado uniformemente na superfície do meio solidificado
Alça de vidro
Alça de Drigalsky
Colônias crescem na superfície do meio de cultura
Ambos os métodos
Número de colônias na placa
Nem muito elevado nem muito baixo
Placas populosas
Algumas células podem não formar colônias
podem se fundir
erros de contagem
Número de colônias pequenas
Significância estatística baixa
Maior valia estatística
Contagem de placas
30 e 300 colônias
Filtração
Quantidade de bactérias muito pequena
Lago
Correntes
Água relativamente puras
100 mL de água
filtro de membrana fino
poros pequenos para permitir passagem de bactérias
Bactérias
Filtradas e retidas na superfície do filtro
Filtro
Transferido para uma placa de Petri
meio nutriente
colônias na superfície do filtro se desenvolvem
Detecção e enumeração de bactérias coliformes
Contaminação fecal
Alimento
Água
Colônias distintivas
Meio nutriente diferencial
Método do número mais provável
Técnica estatística
Maior número de bactérias em amostra
Maior número de diluções
Reduzir densidade até que nenhuma bactéria esteja viva nos tubos de diluição seriada
Microorganismos não crescem em um meio sólido
Bactérias quimioautotróficas nutrificantes
Meio líquido diferencial
Identificar microorganismo
Bactérias coliformes em água
Fermentam lactose
Ácido
Estimativa de 95% de probabilidade
População bacteriana em faixa determinada
MNP estatisticamente o mais provável
Densidade microbiana
Relação de tubos positivos e negativos
Massa total da população
Quantificação Indireta
Turbidimetria
Monitoramente do crescimento bacteriano
Turbidez
Bactérias se multiplicam em meio líquido com as células
Turvo
Opaco
Aparelho para medir turbidez
Espectrofômetro (colorímetro)
Feixe de luz
Transmitido através de uma suspensão bacteriana até um detector fotossensível
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Absorbância
Expressão logarítmica
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Representa graficamente o crescimento bacteriano
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Leituras de absorbância + contagem em placa da mesma cultura
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Suspensão turva
10 milhões a 100 milhões de células por mililitro
Sinais de turbidez visível
Mais de um milhão de células por mililitro devem estar presentes
Não é útil para medir contaminação de líquido quanto temos um número pequeno de bactérias
Atividade metabólica
Quantidade de um certo produto diretamente proporcional ao número de células
CO2
Ácido
Peso Seco
Utilizado para fungos filamentosos
Remoção de fungo
Filtração
Seco em dessecador
Pesagem
Bactérias
Remoção por centrifugação
Pesagem