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PCR CONVENCIONAL - Coggle Diagram
PCR CONVENCIONAL
PCR DE COLÓNIA
PCR de colônia é um método conveniente de alto rendimento para determinar a presença ou ausência de DNA inserido em construções de plasmídeo,na etapa inicial de aquecimento provoca a liberação do DNA do plasmídeo da célula, para que possa servir de molde para a reação de amplificação. Os iniciadores concebidos para atingir especificamente o DNA inserido podem ser usados para determinar se a construção contém o fragmento de DNA de interesse. Alternativamente, os primers direcionados ao DNA do vetor que flanqueiam a inserção podem ser usados para determinar se a inserção tem ou não o tamanho molecular correto
Os iniciadores específicos de inserção podem fornecer informações sobre a especificidade e o tamanho do DNA de inserção, enquanto o uso de iniciadores específicos de vetor permite a triagem de múltiplas construções simultaneamente. O PCR de colônia também pode ser usado para determinar a orientação da inserção. A amplificação por PCR do plasmídeo usando um iniciador específico de inserção emparelhado com um iniciador específico de vetor pode ser projetado para produzir um amplicon de um tamanho específico apenas se a inserção estiver na orientação correta. Em todos os projetos experimentais, a presença ou ausência de um amplicon de PCR e o tamanho do produto são determinados por eletroforese ao lado de um marcador de tamanho de DNA em um gel de agarose
PCR EM TEMPO REAL
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo real é uma técnica de Biologia Molecular que permite replicação in vitro do DNA de forma extremamente rápida.
tecnologia de PCR em Tempo Real ( qPCR ) é uma evolução do método de PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reação em Cadeia da Polimerase). Seu princípio se baseia na duplicação de cadeias de DNA “in vitro” que pode ser repetida diversas vezes, gerando quantidade de DNA suficiente para realizar diversas análises.1
PCR SSLP
Apenas como comparação, enquanto com o uso de microsatélites um polimorfismo pode estar presente a cada 5cM de distância, em uma outra técnica de maior resolução (SSLP) esta distancia pode cair para cerca de 30Kb (kilobases). Já entre os marcadores SNP, esta distância é de aproximadamente 700pb (pares de bases), o que torna o SNP um marcador de altíssima resolução, possibilitando maior capacidade para certificar linhagens e esclarecimento de mutações pontuais espontâneas ou induzidas
Consistem a 1 a 6 nucleotídeos repetidos em tandem, e são classificadas pelo motivo repetido, podendo ser mononucleotídeo, dinucleotídeos, trinucleotídeos, tetranucleotídeos, pentanucleotídeos e hexanucletídeos
PCR INVERSO
transcrição reversa do RNA é um dos principais mecanismos que permite a geração de sequências repetitivas de genes, em particular repetições dispersas. No genoma dos mamíferos, as sequências LINE ou os retrovírus endógenos que contêm ainsi souvent um gene que codifica uma transcrição reversa permitindo a replicação e a multiplicação de elementos móveis.
A transcrição inversa é usada no campo de RT-PCR para quantificador, por exemplo de RNA. Com efeito, a reação em cadeia da polimerase (PCR) amplifica o DNA que difere do RNA para uma diferença de sucre (Désoxyribose pour l'DNA, Ribose pour l'RNA), embora crie uma diferença na base. (L ' uracila (U) de l'RNA corresponde à timina (T) de l'DNA), a RT efetua a troca de base até mesmo para o doador do DNA explorável na PCR.
PCR NESTED
Uma variação da PCR, conhecida como nested PCR (nPCR), utiliza dois conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores em reações subsequentes, cujo produto de amplificação da primeira reação é utilizado como molde para a segunda. Essa técnica é proposta para a detecção do M.
princípio da Nested PCR é o mesmo da PCR convencional, o que vai diferenciar é a origem da amostra contendo o material genético que você irá
utilizar na reação.
Na nested PCR, ao invés de se usar uma amostra primária para fazer a PCR, utiliza-se o produto de uma PCR anterior com um par de primers internos ao par utilizado na primeira reação. Ou seja, é a PCR do produto da PCR
PCR ASSIMÉTRICO
é uma variação de PCR usado para amplificar preferencialmente uma vertente do original DNA mais do que o outro.] A técnica tem aplicações em alguns tipos de sequenciamento e sondagem de hibridização onde ter apenas um dos dois complementares fios é necessário
PCR assimétrica difere da PCR normal pela quantidade excessiva de primers para uma vertente escolhida. Devido à amplificação lenta (aritmética) posterior na reação (após o primer limitante ter sido usado), são necessários ciclos extras de PCR.
Uma modificação neste processo, conhecida como Linear-após-o-exponencial-PCR (LATE-PCR), usa um primer limitante com um maior temperatura de fusão do que o excesso de primer para manter a eficiência da reação, pois a concentração de primer limitante diminui no meio da reação.
PCR MULTIPLEX
Multiplex qPCR é uma solução simples, eficiente e econômica para superar os desafios de amostras limitadas e análises caras. O qPCR multiplex bem-sucedido permite a amplificação de mais de um alvo em uma única reação usando diferentes repórteres com espectros fluorescentes distintos e possibilitando que você use menos de suas preciosas amostras em cada experimento.
PCR ALELO ESPECÍFICO
PCR alelo-específico ou PCR baseada no sistema ARMS (sistema de mutação refractário à amplificação) depende do emparelhamento perfeito das bases dos nucleótidos da extremidade 3' dos primers, permitindo a distinção entre alelos que diferem num único nucleótido, isto é, a detecção de mutações pontuais específicas
PCR TOUCH DOWN
Traduzido do inglês-A reação em cadeia da polimerase de aterrissagem ou a reação em cadeia da polimerase do tipo de aterrissagem é um método de reação em cadeia da polimerase pelo qual os iniciadores evitam a amplificação de seqüências não específicas
PCR in situ
de "imuno-PCR in situ" combina a sensibilidade da Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) com a especificidade e versatilidade do imunoensaio. A ligação entre essas duas técnicas ocorre mediante a formação de um complexo anticorpo-biotina-avidina-DNA que vincula o antígeno a detecção com uma molécula de DNA utilizada como substrato da PCR in situ. . . Reação em Cadeia de Polimerase. . A "Reação em Cadeia de Polimerase" ou PCR foi introduzida no mundo científico na década de 80 e, desde então, revolucionou completamente a prática da biologia molecular. Esta técnica permite aumentar imensamente as quantidades de uma molécula específica de DNA presente numa mistura complexa até quantidades detectáveis por métodos simples como a coloração com brometo de etileno em Agar gel. Pelo fato de ser sensível, rápida e de baixo custo teve um grande impacto nas ciências básicas e nas aplicadas.. . Dentro da área biomédica, o uso da PCR possibilitou o desenvolvimento de novas estratégias diagnósticas baseadas na detecção de seqüências específicas de ácidos nucléicos. Mediante esta técnica é possível detectar ...
PCR HOT START
A PCR de inicialização a quente é uma forma modificada da reação em cadeia da polimerase convencional que reduz a presença de produtos indesejados e dímeros de primer devido à amplificação não específica de DNA em temperatura ambiente
PCR LONG AND ACCURATE
A reação em cadeia da polimerase longa e precisa (LA PCR) refere-se à produção de produto amplificado com mais de ∼3 quilobases (kb) com alta fidelidade. As misturas de PCR longas normalmente geram produtos de PCR com algumas mutações dez vezes menos1 do que aquelas observadas em produtos resultantes da PCR convencional
PCR AFLP
é uma combinação de RFLP e RAPD, incorporando ainda alguns elegantes passos experimentais. A técnica envolve a digestão de DNA com enzima de restrição, conforme requer uma análise de RFLP (veja abaixo). Neste caso, porém, o DNA é digerido com dois tipos de endonucleases (corte raro e corte frequente), gerando fragmentos de diferentes tamanhos. O passos seguintes assemelham-se aos princípios da técnica RAPD
PCR RFLP
Para determinar o estado de doenças genéticas tais como a fibrose cística em um indivíduo.
-Para determinar ou confirmar a fonte de uma amostra do ADN como em testes ou investigações penais de paternidade
-No traço genético para determinar as taxas de recombinação que mostram a distância genética entre os locus.
-Para identificar um portador de uma mutação decausa em uma família
PCR RAPD
A técnica do RAPD faz uso da tecnologia da PCR. Pela técnica da PCR, dois oligonucleotídios específicos (geralmente de 18 a 25 pb de comprimento), complementares a seqüências que circundam o segmento alvo, são sintetizados para servir como "primer" para a reação de amplificação do DNA