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CONTAGEM DE ENTEROBACTERIACEA - Coggle Diagram
CONTAGEM DE ENTEROBACTERIACEA
ISO 21528:2017
indicador
higiênico
de
qualidade
Repetir
procedimentos gerais
pesagem e diluição
25g de amostra + 225 mL água peptonada 0,1%
Esta é a
Diluição 1 (1/10)
Retirar 1 mL
Adicionar em tubo com 9 mL de água peptonada 0,1% ou outro diluente
Esta é a
Diluição 2 (1/100)
Repetir o procedimento até a diluição 3 (10^-3).
Ágar VRBG
"cristal violeta vermelho neutro bile glicose"
seletivo e diferencial
sais de bile e cristal violeta
seletivo para G -
:red_cross: autoclavado
Semeadura em profundidade
Semear
1 mL
nas placas respectivas para cada diluição, em duplicata
Despejar na placa em torno de 20 mL de ágar VRBG até cobrir o fundo
A homogeneização ocorre ao mexer de forma delicada as placas, de 2 em 2, imitando o número 8
colocar sobrecamada no ágar já solidificado
incubação:
37ºC, por 24 horas com as placas invertidas
Resultados
Escolher 5 colônias típicas para testas confirmatórios
pontos
vermelhos ou róseos
:red_circle:
Ágar nutriente
37ºC, por 24 horas
porque outros gêneros não Enterobacteriacea podem se desenvolver
selecionar placas com contagens entre 15 a 150 colônias
no exemplo, diluição 10^-1
placa I: 120 colônias
placa II: 95 colônias
média: 107,5 colônias
para considerar a
proporção de colônias testadas e positivas
para oxidase e fermentação
5 colônias testadas --- 100%
4 positivas enterobacteriacea ---
x = 80%
107,5 x 10^1 (inverso da diluição) x 0,8 (porcentagem de colônias +) =
8,6 x 10^3 UFC/g ou 3,93 log UFC/g
Testes confirmatórios
Oxidase
presença da enzima
citocromo oxidase
1 alçada da cultura proveniente do ágar nutriente
disco/fita de oxidase, com esfregaço
:red_cross: para oxidase
cultura permanece na coloração original (amarelada)
Fermentação de
glicose
meio Glicose OF
para
diferenciar
de outros gêneros (ex. acetobacter) que são oxidase -
cultura inoculada com agulha de platina em 2 tubos
1 dos tubos: gotas de
óleo mineral
para gerar ambiente anaeróbio
incubação:
37ºC, por 24 horas
Resultado
:check: enterobacteriacea
ambos tubos
amarelos