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工欲善其事,必先例其「基」 - Coggle Diagram
工欲善其事,必先例其「基」
取得符合要求的DNA片段
限制性核酸內切酶
分子剪刀
分子剪刀可以完整地切下個別基因
PCR
PCR也可以用於擴增基因區段
凝膠電泳
用於大分子(如DNA、RNA、蛋白質)以及其碎片的分離和分析
也可以作為預處理技術
在進行質譜、聚合酶連鎖反應、複製、DNA測序或者免疫墨點等檢測之前,進行分子的純化
凝膠電泳還可以用於分離奈米微粒
構建基因的表現載體
DNA連接酶
分子針線
兩種DNA片段重新連接
兩個DNA片段連接起來
病毒載體
常使用於分子生物學的工具
種類
腺病毒
逆轉錄病毒
腺相關病毒
慢病毒
巨細胞病毒
仙台病毒
流感病毒
麻疹病毒
質體載體
質體
細胞的染色體或核區DNA之外,能夠自主複製的DNA分子
它是基因工程最常見的轉載體
將目的基因匯入受體細胞
約1%的細菌天然能攝取外源DNA
通過外部刺激誘導其他細菌產生
電擊
熱
增加其細胞膜對DNA的通透性
DNA
已吸收的DNA
可以與基因組整合或作為染色體外DNA(如質體)存在
植物
基因槍技術
農桿菌介導的重組
質體構建體
T-DNA
負責將DNA插入宿主植物基因組
生物動力學
金或鎢的顆粒用DNA包被
然後注射到愈傷組織細胞或植物胚胎
動物細胞
使用顯微注射
目的基因的檢測與鑑定
選擇標記
細胞
區分轉化
未轉化
通常存在於基因轉殖生物體中
產生後代
可篩選基因的存在
來自第一代
插入的基因將是雜合
必須交配在一起以產生純合動物
進一步的測試
PCR
南方墨點法(Southern印跡)
進行DNA測序以確認生物體含有新基因
基因改造生物的基因組DNA提取出來
放射性同位素等做標記
作為探針
探針與基因組DNA雜交
示出雜交帶
表明目的基因已插入染色體DNA
不保證靶組織中以適當的水平表達
尋找基因產物
測量基因產物
方法
定量即時聚合酶鏈鎖反應(RT-PCR)
西方墨點法
北方墨點法(Northern印跡)
免疫螢光
酵素免疫分析法(ELISA)
表型分析
RNA和蛋白質
補充資料