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Técnicas de Biología molecular, ¿Cómo?, ¿Cómo?, ALEJANDRO VERDUZCO…
Técnicas de Biología molecular
Extracción de ADN:
Es un método por el cual se obtiene el ADN a partir de las células.La extracción consiste en separar el ADN de otros componentes celulares (como la membrana o las proteínas)
.
¿Cómo?
Se debe lisar o romper nuestras células para extraer el ADN y todos los componentes celulares libres.
Se debe degradar las proteínas principalmente las unidas al ADN y las del citoplasma usando proteasa K.
Después se separan los diferentes componentes celulares del ADN con disolventes orgánicos
Posteriormente se debe precipitar con etanol y/o centrifugación .
Como el etanol precipita también al ARN (por que son polimeros muy similares) se debe colocar una RNAsa, el cual rompe el ARN con el fin de dejar solo ADN
Se inactiva la enzima de ARN con calor y despues se resuspende el ADN en agua ultra pura con el fin de manipularlo mejor Por ultimo seCuantificación de ADN: se mide la concentración del ADN usando un equipo llamado espectrofotómetro para conocer la cantidad de ADN total de nuestro material biológico.
Clonación:
La clonación molecular (de ADN) es un proceso que amplifica una secuencia concreta de ADN (es decir, obtener muchas copias de ella). .
Después se inserta este fragmento dentro de otra molécula de ADN (conocida con el nombre de 'vector')
Y finalmente, se introduce en una célula huésped adecuada. Cada vez que esta célula huésped se divide, se replica también la secuencia de ADN foráneo insertado, como si fuera una parte más de su propio ADN.
Primero se aísla la secuencia diana
PCR:
PCR (reacción en cadena de la polimerasa)
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; resulta mucho más sencillo identificar, con una probabilidad muy alta, virus o bacterias causantes de una enfermedad
Fase de apareamiento:
unión de los primers a la secuencia concreta que ha quedado separada en la fase anterior.(45°-55°)
Fase de elongación:
una vez unido el primer a su cadena complementaria de ADN, la ADN polimerasa realiza su función, añadir nuevos nucleótidos complementarios a la hebra molde obteniendo como resultado una molécula de ADN de doble cadena
Fase de desnaturalización:
rotura de los puentes de hidrógeno que mantienen unidas ambas hebras del ADN
CRISPR-CAS9:
En resumen, CRISPR utiliza unas guías y una proteína (Cas9) para dirigirse a zonas elegidas del ADN y cortar. A partir de ahí, se pueden pegar los extremos cortados e inactivar el gen, o introducir moldes de ADN, lo que permite editar sus ‘letras’ a voluntad.
Secuenciación
La secuenciación del ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN
¿Cómo?
¿Cómo?
ALEJANDRO VERDUZCO GUTIERREZ
