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Microscopia de fluorescencia - Coggle Diagram
Microscopia de fluorescencia
Se relaciona con la Bioluminiscencia
Fosforecencia
Proceso de relajación lento
Fluorescencia
Pasos
Emisión
Absorción
Disipación
Necesitan la iluminación de alta energía
Proceso de relajación rapida
Quimioluminiscencia
Por reacciones quimicas
Interactuan
Sustrato
Luciferina
Enzima
Lucierasa
Jablonski
El camino más probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el tiempo de vida media del estado excitado
Microscopio de fluorescencia
Partes
Objetivos
Gran capacidad de transmitir luz
Gran apertura numérica
Filtros
De excitación
Filtra la long de onda para provocar la excitación
De emisión
Filtra luz que se quiere observar
Fuente de luz
Emite luz de alta energía
Tipos
De mercurio
Luz ultravioleta
Rayos laser
Tipos
Microscopio de fluorescencia confocal
Se ven todas las emisiones en simultaneo
Hace foco plano a plano
el láser barre la muestra a gran velocidad
fotomultiplicador (PMT)
Fotografias mas claras
filtro pinhole, bloquea el paso de toda señal fuera de foco
Con software se pueden obtener imagenes tridimensionales
Filtro concentra la máxima intensidad de la luz en el plano de foco
Microscopio de fluorescencia convencional
Solo observa un color a la vez
Se deben combinar fotografías
microscopio multifotón
No requiere pinhole;
ilumina exclusivamente el punto del espacio barrido en ese momento
microscopios TIRF
sólo irradian el plano situado inmediatamente sobre el cristal
imágenes de deconvolución
eliminan la señal fuera de foco mediante algoritmos informáticos
Por origen de fluorocromos
Añadiendo fluorocromos
Fluorescencia inducida
Marcar estructuras
Imunofluorescencia
Marcar anticuerpos
Antigenos
Anticuerpos
Natural sin agregados
Autofluorescencia
Especies con fluorescencia natural
Fluorocromos
Naturales
nucleótidos de flavina oxidados
clorofilas
nucleótidos de nicotina reducidos (NADH, NADPH),
proteínas fluorescentes (GFP).
Muy extraida y usada
Chalfie
Insertó la proteína a un org. completo
Shimomura
Descubrió la proteína
Artificiales
Rodamina (TRITC)
Naranja de acridina
Fluoresceína (FITC)
Yoduro de propidio
Cascade blue
Estudiados por Tsien
Creó variedad de fluorocromos de diferentes colores
Aplicaciones
• Marcaje de moléculas en células y tejidos para su caracterización e identificación.
• Estudio de células normales y patológicas.
• Estudios inmunológicos.
• Mineralogía.
