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INMUNOENSAYOS, TÉCNICAS DE SEPARACIÓN - Coggle Diagram
INMUNOENSAYOS
FLUOROINMUNOENSAYOS
Sustancias excitadas por longitud de onda adecuada
Emisión de longitud de onda mayor
En fluorescencia la emisión termina con la absorción
Marcadores con alta intensidad de emisión
La marca no afecta propiedades inmunológicas
Soluble en agua y estable en conjugación
Marca susceptible a interferencias
DELFIA
Lantanamidos Eu+3
MEIA
Fosfatasa
FPIA
Disminución de intensidad de luz en presencia de complejo inmune
ENZIMOINMUNOENSAYOS
Alternativa a radioisótopos
Elevado número de moléculas convertidas a producto en poco tiempo
Puros y sensibles
Susceptibles a interferencias
HETEROGENEOS
Enzima unida a inmunoabsorbente, rol pasivo
Competitivos o no competitivos
ELISA
HOMOGENEOS
Menos sensibles pero automatizables
Afecta actividad enzimática
Enzima rol activo
Cambio de señal depende de inhibición de la enzima
EMIT
Enzima en calidad de marcador
Enzima se acopla a analito a medir
Enzima no unida puede formar sustrato
La unión disminuye la actividad enzsimática
ELECTROQUIMIOINMUNOANÁLISIS
Reacción quimioluminiscente generando especies reactivas
Aplicación de precursores estables a diferente potencial
INTERACCIÓN QUELATO Y RUTENIO
Quelato produce sales estables que pueden acoplarse a moléculas de interés
Conjugados de alta actividad específica
Amplificación de señal a partir de moléculas marcadas
Limites bajos en detección, amplios intervalos
Permite fijación de biotinilados
Sin interferencias por efecto matriz, disminuye probabilidad de efecto Hook
QUIMIOINMUNOENSAYOS
Moléculas excitadas electronicamente
Disipación de moléculas de luz
Sensibles y en rango submolar
Medida cuantitativa en cantidad de emisión de luz
DIRECTA
INDIRECTA
Estado excitado para transferir energía
Medida de luz emitida
LUMINOL
ISOLUMINOL
ESTERES DE ACRIDINA
FOSFATASA ALCALINA
PEROXIDASA
ENSAYOS COMPETITIVOS
Medición espacios de anticuerpo sin ocupar
Cálculo implícito de sitios ocupado con hormona
Competencia entre hormona marcada y la no marcada
ENSAYOS NO COMPETITIVOS
Medición espacios de anticuerpos ocupados
Utilización de doble anticuerpo (Marcado y sin marcar
Formación de sándwich que usa todo el analito disponible
USO DE READIOISÓTOPO
RIA
Dos formas de antígeno presentes
GRÁFICA DE SCATCHARD
Ag-Ac presente en forma homogénea quimicamente
Univalentes
Reacción equilibrada
Calculable
Horma libre y hormona con radioisótopo
Concentración inversamente proporciona entre hormonas
IRMA
Dos anticuerpos monoclonales a dos epítopes de hormona
Concentración de anticuerpos 50 a 100 veces mas que en RIA
Requiere incubación y altos valores de concentración de analito
TÉCNICAS DE SEPARACIÓN
HETEROGENEOS COMPETITIVOS
Unión antígeno anticuerpo
Separación de hormona unida a anticuerpo
RADIOIUNMUNOANALISIS
Marcador radioactivo
RIA
ENZIMOIUNMUNOANÁLISIS
Marca con enzima
EIA
FLUOROINMUNOANÁLISIS
Marca con fluorocromo
FIA
QUIMIOINMUNOANÁLIS
Marca con sustancia quimioluminiscente
QIA
HETEROGENEOS NO COMPETITIVOS
Separación de fracciones libres y unidas
INMUNORADIOMÉTRICO
INMUNOENZIMÉTRICO
FLUOROINMUNOMÉTRICO
QUIMIOINMUNOMÉTRICO
Marca con sustancia quimioluminiscente
ICMA
Marca con fluorocromo
IFMA
Marca con enzima
IEMA
Marca con radioisótopo
IRMA
COMPETITIVOS HOMOGENEOS
Unión antígeno anticuerpo
No se separa complejo Ac-Ag
Uso de marcas enzimáticas
Cuantificación de analitos con pequeño tamaño
EMIT
FPIA