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DIAGNÓSTICO MOLECULAR, CLAUDIO DE OLIVEIRA- 17202113 - Coggle Diagram
DIAGNÓSTICO MOLECULAR
PCR
AMPLIFICAÇÃO DE UMA REGIÃO DO DNA. COMPONENTES: DESOXIRRIBONUCLEICOS, TAQ DNA POLIMERASE, SOLUÇÃO TAMPÃO DE MAGNÉSIO. ETAPAS: DESNATURAÇÃO 95°C, ANELAMENTO/HIBRIDIZAÇÃO 55° E 65°C, POLIMERIZAÇÃO 72°C. :
DIFERENCIAÇÃO POR ELETROFORESE: VISUALIZAÇÃO DOS FRAGMENTOS: CORAR COM AGENTES INTERCALANTES, TRANSILUMINADOR, IDENTIFICAÇÃO DOS FRAGMENTOS DE DNA
PARASITAS QUE PODEM SER DIAGNOSTICADOS POR PCR: Plasmodium spp, Trypanosoma cruzy, Leishmania spp, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Cystoisispora belli, entre outros.
qPCR: ETAPAS: AMPLIFICAÇÃO + DETECÇÃO, TERMOCICLADOS ACOPLADO A UM FLUORÍMETRO, CORANTES FLUORESCENTES, HIBRIDIZAÇÃO DA SONDA FLUORESCENTE, DETECÇÃO DA SEQUÊNCIA ALVO.
ALGUNS PARASITAS ENCONTRADOS COM qPCR: INVESTIGAÇÃO DE SINDROMES GASTROINTESTINAIS. Ascaris lumbricoides, Taenia spp, Schistosoma.
RT-PCR:ETAPAS: TRANSCRIPTASE REVERSA, DNA COMPLEMENTAR, PCR ESPECIFICA, DETECÇÃO DE mRNA
ALGUNS PARASITAS ENCONTRADOS COM RT-PCR: OOCISTO DE Entamoeba histolytica, Entamoeba spp, Giardia intestinalis.
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OUTRAS VARIAÇÕES: nested-PCR (nPCR), PCR-RFLP, AP-PCR, PCR-AFLP
CARACTERÍSTICAS GERAIS
VANTAGENS:EFICACIA, RESULTADOS RAPIDOS, ALTA ESPECIFICIDADE.
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DESVANTAGENS: RISCO DE CONTAMINAÇÃO, NECESSIDADE DE INFRAESTRUTURA E CUSTOS LABORATORIAIS.
MICROFLUÍDICA: ANALISE DE FLUIDOS EM UM MICROCHIP.
VANTAGEM: PEQUENA QUANTIDADE DE AMOSTRA E REAGENTE, SENSIBILIDADE, REDUÇÃO DE CUSTO E TEMPO.
ALGUMAS PARASITOSES ENCONTRADAS: TRUIQUINOSE, ANCILOSTOMOSE.
LUMINEX: UTILIZA-SE MÚLTIPLOS ANALITOS, MICROESFERAS FLUORESCENTES, DETECÇÃO POR CITOMETRIA DE FLUXO. PODE SER COMBINADO COM PCR, qPCR, nPCR.
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