Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Historia de la secuenciación de DNA, Gerardo Negrete Granados, Referencia…

- - - - 1970: Sistema de "más y menos" de Alan Coulson y Sanger
        
        Utilizó la ADN polimerasa para sintetizar a partir de un cebador, incorporando nucleótidos radiomarcados
        
        Dos segundas reacciones de polimerización
        
        Reacción 'más', en la que solo está presente un tipo de nucleótido
        
        Reacción 'menos', en la que se utilizan tres, que produce secuencias hasta la posición anterior al siguiente nucleótido faltante
      - 1975 y la técnica de escisión química de Allan Maxam y Walter Gilbert
        
        El ADN radiomarcado se trata con sustancias químicas que rompen la cadena en bases específicas
        
        Después de correr sobre un gel de poliacrilamida, se puede determinar la longitud de los fragmentos escindidos
        
        Por lo tanto, inferir la secuencia
        
        Primera técnica que se adoptó ampliamente
        
        Nacimiento de la secuenciación del ADN de "primera generación".
  - - - Utiliza análogos químicos de los desoxirribonucleótidos (dNTP) que son los monómeros de las cadenas de ADN.
      - Los didesoxinucleótidos (ddNTP) carecen del grupo hidroxilo 3 'que se requiere para la extensión de las cadenas de ADN
      - Cuatro reacciones paralelas que contienen cada base ddNTP individual y ejecutar los resultados en cuatro carriles de un gel de poliacrilamida.
      - Autorradiografía para inferir cuál era la secuencia de nucleótidos en la plantilla original.
  - - - Fragmentos de ADN superpuestos se clonaron y secuenciaron por separado y luego ensamblados en una secuencia contigua larga
- - - - Proceso de dos enzimas en el que se usa ATP sulfurilasa para convertir el pirofosfato en ATP
      - Que luego se usa como sustrato para la luciferasa, produciendo así luz proporcional a la cantidad de pirofosfato
      - Inferir la secuencia midiendo la producción de pirofosfato a medida que cada nucleótido se lava.
      - Características beneficiosas:
        
        Podría realizarse utilizando nucleótidos naturales
        
        Se observó en tiempo real
      - Principal dificultad
        
        Averiguar cuántos del mismo nucleótido hay en una fila en una posición determinada
      - Evolucionó hasta convertirse en la primera tecnología comercial exitosa de "secuenciación de próxima generación" (NGS).
  - - - Fue adquirido por Illumina
      - Las moléculas de ADN con corchetes adaptadores se pasan sobre un césped de oligonucleótidos complementarios unidos a una celda de flujo
      - "Amplificación en puente"