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métodos e instrumentos básicos para el estudio de la histología
técnica de inclusión por parafina
aclaramiento
se utilizan solventes orgánicos como xileno o tolueno que son miscibles tanto en alcohol como en parafina, para extraer el alcohol al 100% antes de la infiltración de la muestra con parafina fundida. cuando la parafina se ha enfriado y endurecido se empareja para formar un bloque de tamaño adecuado llamado "taco".
infiltrado e inclusión en parafina para permitir el corte (paso 2)
medio de inclusión que permite realizar cortes muy delgados de 5 a 15 um (1 micrómetro equivale a una milésima parte de un milímetro
deshidratación
en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar alcohol al 100%
corte micrótomo
corta en rebanadas finas con una cuchilla de acero y los cortes obtenidos se montan en un portaobjetos de vidrio a los que se les añade una pequeña cantidad de medio montaje.
fijación (primer paso)
es obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales que conserva la estructura del tejido de forma permanente para permitir el tratamiento ulterior.
se utiliza para:
-abolir el metabolismo celular
-impedir la degradación enzimática de las células y de los tejidos por autolisis (autodigestión)
-destruir los microorganismos patógenos como las bacterias, hongos y los virus
-endurecer el tejido como consecuencia de la formación de enlaces cruzados o de la desnaturalización de las moléculas proteicas.
FORMALINA: es una solución acuosa de formaldehido al 37% en diluciones variadas y en comparación con otras sustancias químicas y amortiguadores
tinción rutinaria H/E (paso 3)
el tejido se tiñe con hematoxilina en agua, como el colorante de contraste, la eosina es mas soluble en alcohol que en agua se vuelve a deshidratar la muestra en soluciones alcohólicas de concentración creciente y después se tiñe con eosina en alcohol
obtención del tejido
tinción con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina
el objetivo es comprender la microanatomia de las células, los tejidos y los órganos, y correlacionar la estructura con la función.
los trabajos prácticos de laboratorio de histología utilizan microscopios ópticos o microscopia virtual que consiste en un método para examinar especímenes microscópicos digitalizados.
algunas técnicas son:
histoquímica
inmunocitoquimica y técnicas de citohibridacion
radioautografia
-cultivo de tejidos y órganos
-separación de células y orgánulos por centrifugación diferencial
-microscopios y técnicas microscópicas especializadas.
montaje
es un adhesivo como:
-albumina
-pinero o
-resinas acrílicas
unidades de medida del sistema métrico decimal utilizadas en la observación con el microscopio fotonico y electrónico
tecnicas por congelamiento (criostato)
pasos del procedimiento
congelación de tejido, se congelan muestras de tejido de tamaño pequeño mediante el uso de anhídrido carbónico comprimido o mediante la inmersión de un liquido frio (isopentano) a una temperatura de -50 °c .
corte del tejido congelado se realiza dentro de un criostato en rebanadas muy finas de 5 a 10 mm.
tinción de los cortes se realiza para diferenciar los núcleos celulares del resto de las estructuras del tejido
las tinciones que mas se utilizan para las biopsias por congelamiento son:
-H-E
-azul metileno
-PAS
usos
evaluar de inmediato el tejido obtenido durante el acto quirúrgico, en especial cuando el diagnostico patológico puede determinar el paso siguiente de la cirugía.
ventajas y desventajas
que la técnica de congelamiento es mas rápida y se utiliza solo en procesos quirúrgicos y la técnica por parafina es mas tardada y laboriosa y se emplea para estudio en laboratorios.