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CONTAGEM DE ESTAFILOCOCOS COAGULASE POSITIVA - Coggle Diagram
CONTAGEM DE ESTAFILOCOCOS COAGULASE POSITIVA
Ocorre por meio da
Técnica de plaqueamento de superfície
Dividida em 3 etapas
ETAPA 2
1- Depois de fazer a homegenização, verter o meio de cultura nas placas
2-As placas ficam em repouso para que ocorra a solidificação do meio de cultura
3- Com as placas prontas, meio solidificados sobre a placa, se parte para a diluição da amostra ( sempre 25 gramas da amostra pra 225 mL pra obter a diluição de 10^-1) O diluente é a água salina peptonada 0%
4- As diluições subsequentes sempre serão feitas com 1ml da diluição anterior.
5- Após, é feito o plaqueamento do micro-organismo (pipetar dentro daquelas placas que já estão como meio previamente solidificado, 0,1mL da diluição correspondente).
6- Feito isso, realizar o espalhamento do inóculo sobre o meio de cultura, sempre partindo da diluição 10^-4 pra 10^-1.
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ETAPA 3
1- Após 24h é feito a leitura das placas
2- Se tiverem colônias típicas de Staphylococcus é dado a sequência da análise, pra confirmar realmente que aquelas colônias são de Staphylococcus aureus e não de outro tipo de Staphylococcus.
3- Dar continuidade no processo
4- Passar as colônias no caldo BHI para confirmar se realmente é Staphylococcus Aureus
1 -Pegar 1 colônia bem isolada e colocar no caldo BHI. Repetir o processo nas 4 diluições (10^-1 ; 10^-2 ; 10^-3; 10^-4)
2-Os tubos de caldo permanecem na estufa por 24h
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(De cada placa será pego duas colônias bem isoladas. É feito a raspagem das colônias com o auxílio da alça de platina.)
ETAPA1
No meio liquefeito, segue-se essas etapas:
1- suplementação do meio = adiciona-se as quantidades necessárias de Telurito de Potássio 1% e emulsão de gema de ovo
2- O meio precisa estar suplementado e dispensado em todas as placas de petri com o meio solidificado
3- O plaqueamento desse meio é feito.
4- Após isso, identificar as placas. Depois suplementar o meio quando ele tiver entre 45 a 50 graus. Para 1 litro de meio de cultura, deve-se adicionar 50 ml de solução de gema de ovo e 10 ml de solução de Telurito de potássio. Ou seja, adicinou-se a gema e depois o clorito de potássio e depois faz a homegenização.
Preparação Emulsão:
Materiais
1 béquer não estéril (descarte da clara do ovo)
1 colher para pinçar o ovo
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Procedimento:
Com o auxilio da colher , pegar o ovo e levar ele a chama, para que o álcool da casca do ovo seque.
Com o auxilio de uma espátula, quebrar a tampa do ovo para conseguir tirar a clara e manter dentro só a gema
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Meio de cultura : Ágar Baird Parker (ABP)
Meio básico sendo preciso suplementar por meio da adição de outras substâncias após o processo de esterilização desse ágar pra que ele tenha todos os nutrientes necessários pro crescimento daquele micro-organismo;
A suplementação é feita com uma solução de Telurito de potássio 1% (que será reduzido em teureto e produzirá colônias específicas) e emulsão de gema de ovo (a utilização da lecitina gerará um alo em volta da colônia) esses aconteciementos mostrará que o Staphylococcus aureus está presente naquele meio.
Por que fazer esse procedimento?
A principal importância de determinar se o Staphylococcus aureus está presente é por conta da
toxina estafilocócica que ele produz, sendo ela extremamente tóxica ao nosso organismo
.
Além de que sua presença nos dá uma
visão geral da sanidade desse alimento em relação a preparo, a estocagem, a forma de manuseio desse alimento enquanto ele sendo preparado
, pois o Staphylococcus aureus está presente nas nossas vias aéreas superiores, então é muito fácil contaminar o alimento.
Aspecto característico das colônias de Staphylococcus :colônias pretas e alos de precipitação visiveis.