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EXTRACCIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS images - Coggle Diagram

- - - - al concluir la lisis celular y la inactivación conocido como purificación
      - se añade hidroxiquinolina siendo inhibidor parcial de ARNsas para los iones metálicos y así identificar la dase orgánica por color amarillo
      - combinan estrategias como extracción/precipitación
      - PRECIPITACION DEL ADN
        
        ADN disuelto en solución acuosa, se precipita añadiendo alcohol
        
        ácidos nucleicos son insolubles en solución alcohólica
        
        Etanol se necesita precipitación dos veces
        
        isopranol solamente 0.7 veces de fase acuosa, acelera el proceso, tiempo menor de incubación, teniendo precipitación a temperatura de ambiente.
    - - ADN se disuelve por pipeteo logrando solución homogénea
      - la solución debe ser mínima para concentración adecuada de AN
      - después de la evaporación el ADN se disuelve libre de ADNsas
    - - empleando detergentes
      - elimina proteínas mediante extracción y lípidos con solventes orgánicos
      - fundamental en lisis total celular
      - deja el ADN liso para la separación en soluciones alcohólicas
      - se usa solución de 25:24 para el fenol, cloroformo.
      - LISIS DE LAS CÉLULAS Y LEBERACIÓN DEL ADN
        
        desintegración de tejidos se lleva acabo en buffer de lisis
        
        incubación de enzimas se hace por 2 horas a 65C en ADN, para ARN se emplea homogenizado eléctrico de 200-1000 rpm
        
        no se debe dañar el ácido nucleico
        
        es critico y debe ser agresivo y lograr fragmentación del tejido y roptura de membrana
        
        lisis con detergente sds
- - - - CULTIVO CELULAR, TEJIDO, EXPECTORACION, SUERO, ORINA, LC.
    - - PUREZA, TIEMPO DE EXTRACCION VARIAN DEPENDIENDO LA METOLOGIA A APLICAR
    - - MAMIFEROS, PLANTAS, PROCARIOTAS O VIRUS