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Extracción de ácidos nuclicos - Coggle Diagram
Extracción de ácidos nuclicos
al pipetear o agitar el ADN se genera flujo hidrodinámico, conforme el tamaño necesitado la técnica se dificulta
es el primer paso para la mayoría de estudios.
organismo de origen del ácido nucleico
Fuente del ácido nucleico
por el tipo de ADN que se va a extraer o se extrajo
retro transcripción.
PCR.
clonación.
northern blot.
southern blot.
Técnica
fenol-cloroformo
fundamental en la lisis total de las células por medio de detergentes, listo para separación por precipitación. en alcohol.
solución con relacion 24:24:1 v/v; fenol. cloroformo. alcohol isoamílico.
añadiendo hidroxiquinolina al 0.1%: antioxidante.
precipitación de ADN
ADN disuelto en solución acuosa, alcohol por ser insolubles en estos.
si se emplea EtOH, la cantidad requeria es dos veces el volumen
emplear IprOH puede acelerar el proceso
Lavado del ADN
se lava con etanol al 70%, al menos 2 ocasiones, permite la disolución de las sales presentes.
disolución del ADN y adición de ARNsa
luego de la evaporación del alcohol. se disuelve en soluciones que lo preserven
cantidad mínima para disolver
el ADN se disuelve por pipeteo contante
lisis
homogeneización del tejido, romper membranas celulares y nucleares
disgregación del tejido se hace en un buffer que contiene sales u detergente.
incubación con la enzima por 2 horas a 65°C
con solventes orgánicos
Proceso de purificación, retirar restos celulares
extracción/precipitación.
cromatografía.
centrifugación.
electroforesis.
separación por afinidad
Cuantificación de los ácidos nucleicos
espectrofotometría
cualquier solución que contenga moléculas suspendidas permite el paso de luz
ADN y ARN absorción máxima de longitud de onda de 260nm UV
490-530 nm
505nm
entre mayor luz absorbida mayor la concentración de ácido nucleico.
dilución:
diluciones de 1:100 a 1:1000 del stock de ADN, en una solucion de fosfato de sodio dibásico permite leer los ácidos.
constante: valor teórico del OD para cada ácido.
50 -ADNds.
40 -ARN.
33 - oligonucleótidos.
37 - ADNss.
fluorometría