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CONTAGEM DE ESTAFILOCOCOS COAGULASE POSITIVA, PARTE 1, PARTE 2, PARTE 3 -…
CONTAGEM DE ESTAFILOCOCOS COAGULASE POSITIVA
Aspecto caract das colônias de staphlococus – colônias pretas e alos de precipitação
Procedimento:
Técnica de plaqueamento de superfície
Após é feito o plaqueamento desse micro-organismo (pipetar dentro daquelas placas que já estão como meio previamente solidificado, 0,1mL da diluição correspondente).
Feito isso, é feito o espalhamento desse inóculo sobre o meio de cultura, sempre partindo da diluição 10 a -4 pra 10 a -1.
E diluições subsequentes sempre com 1ml da diluição anterior.
Essas placas vão pra na estufa, são encubadas a 35ºC por 24hrs.
3- Com as placas prontas, meio solidificados sobre a placa, parte para a diluição da amostra, sempre 25 gramas da amostra pra 225 mL pra obter a diluição de dez a menos um. Diluente : Agua salina peptonada 0%
Após 24h é feito a leitura,
se tiverem colônias típicas de Staphylococcus é dado a sequência da análise, pra confirmar realmente que aquelas colônias são de Staphylococcus aureus e não de outro tipo de Staphylococcus.
Dar continuidade no processo
Passar as colônias no caldo BHI para confirmar se realmente é Staphlococus Aureus
1 -pegar uma colônia bem isolada e colocar no caldo BHI,repetir o processo nas 4 diluições (10^-1 ; 10^-2 ; 10^-3; 10^-4)
(De cada placa será pego duas colônias bem isoladas. É feito a raspagem das colônias com o auxílio da alça de platina.)
2-Os tubos de caldo permanecem na estufa por 48h
**
3- Depois de ficar 48h na Estufa os tubos de caldo são retirados e passam para a fase de verificação (ver se é Staphlococus Aureus)
1- Diluir o frasco de plasma de coelho em 3mL de solução fisiológica estéril
2 -P/ cada tudo de diluição deve fazer um tubo de hemólise
3- Pipetar 0,2 mL dos tubos de caldo nos tubos de hemólise
4- Pipetar em todos os tubos de hemólise 0,2mL de plasma
5-Tampar os tubos e agitar levemente
6- Tubos de hemólise vão para estufa a 35 graus Celcius
7- Os tubos serão verificados com 1h, 2h, 4h, 6h, 12h e 24h
8- Ao analisar os tubos, se houver coagulação, será confirmado a presença de S. Aureus
9-Todos os tubos tem que ser verificados e se somente se todos estiverem coagulados teremos contagem positiva para Staphylococcus aureus
3- é feito o plaqueamento desse meio.
1- suplementação do meio = adiciona-se as quantidades necessárias de Telurito de Potássio 1% e emulsão de gema de ovo
Preparação Emulsão:
Materiais:
um béquer esterelizado,
uma espátula
uma colher para pinçar o ovo
outro béquer não estéril (para descartar a clara do ovo )
Procedimento:
Com o auxilio da colher vou pegar o ovo e levar ele a chama, para que o alcool da casca do ovo seque.
Com o auxilio de uma espátula eu vou quebrar so a tampa do ovo para conseguir tirar a clara e manter la dentro so a gema
Após isso, coloco o béquer na balança e zero a balança e dps dispenso toda a gema no béquer e peso o valor da gema. (16,940kg).
Após isso adiciona a essa gema a msm quantidade em peso de água salina estéril, ou seja, 16,940kg
Depois disso, faz a homogenização (misturar a gema com a água salina).
No meio liquefeito, segue-se essas etapas:
Depois de fazer a homegenização, verter o meio de cultura nas placas
As placas ficam em repouso p/ solidificação do meio de cultuta
4- Após isso, identificar as placas. Depois suplementar o meio quando ele tiver entre 45 a 50 graus. Para 1 litro de meio de cultura, deve-se adiciona 50 ml de solução de gema de ovo e 10 ml de solução de clorito de potássio. Ou seja, adicinou-se a gema e depois o clorito de potássio e depois faz a homegenização.
2- O meio precisa estar suplementado e dispensado em todas as placas de petri com o meio solidificado
Meio de cultura : Ágar Baird Parker (ABP)
meio básico, sendo preciso suplementar por meio da adição de outras substâncias após o processo de esterilização desse ágar pra que ele tenha todos os nutrientes necessários pro crescimento daquele micro-organismo
deve ser suplementado com uma solução de telurito de potássio 1% (que será reduzido em teureto e produzirá colônias específicas) e emulsão de gema de ovo (a utilização da lecitina gerará um alo em volta da colônia) esses aconteciemento nos mostrará que o Staphylococcus aureus está presente naquele meio.
Por que fazer esse procedimento?
Além de que sua presença nos dá uma
visão geral da sanidade desse alimento em relação a preparo, a estocagem, a forma de manuseio desse alimento enquanto ele sendo preparado
, pois o Staphylococcus aureus está presente nas nossas vias aéreas superiores, então é muito fácil contaminar o alimento.
A principal importância de determinar se o Staphylococcus aureus está presente é por conta da
toxina estafilocócica que ele produz, sendo ela extremamente tóxica ao nosso organismo
.
PARTE 1
PARTE 2
PARTE 3