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TIPOS DE EXTRACCION DE ADN - Coggle Diagram
TIPOS DE EXTRACCION DE ADN
Extracción de ADN por la
técnica fenol-cloroformo
se fundamenta en la lisis total de las células y
sus estructuras subcelulares
deja al ADN puro listo para su separación
por precipitación en soluciones alcohólicas
Es la técnica más empleada, por la cantidad y la calidad del ADN obtenido
Lisis de las células y liberación del ADN
El primer paso en la extracción es la homogeneización del
tejido y la lisis con detergentes
El proceso debe ser lo suficientemente agresivo como para lograr la fragmentación del tejido y la rotura de la membrana celular, sin dañar el acido nucleico.
Extracción de proteínas y lípidos
con solventes orgánicos
Al concluir la lisis celular y la inactivación de nucleasas, se retiran los restos celulares, proceso conocido como purificación.
Métodos de purificación de ácidos nucleicos
extracción/precipitación
cromatografía
centrifugación
electroforesis
separación por afinidad
Precipitación de ADN
El ADN disuelto en la solución acuosa se precipita añadiendo alcohol absoluto
Los ácidos nucleicos son insolubles en soluciones alcohólicas
Lavado del ADN
El botón de ADN obtenido en la precipitación se lava con
etanol al 70% por, al menos, dos ocasiones
El contenido de alcohol de esta solución mantiene al ADN precipitado
El H2O (30%) permite la disolución de las sales presentes
Disolución del ADN y adición de ARNsa
Después de la evaporación del alcohol, el
botón de ADN se disuelve en soluciones que aseguren su
Agua estéril y libre de ADNsas
Soluciones amortiguadoras, buffer Tris EDTA (TE).
La cantidad de solución para disolver el ADN debe ser mínima para mantener una concentración adecuada del ácido nucleico