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EXTRACCIÓN DEL ADN, Elección de metodo de extracción: - Coggle Diagram
EXTRACCIÓN DEL ADN
Consideración para su extracción:
:check: estabilidad quimica dada por su estructura helicoidal, es frágil ya que es larga, tortuosa y con un peso molecular alto que hace que se someta a fuerzas hidrodinámicas que la disgregan
:check: al pipetiar se genera un flujo hidrodinámico que separa las dos cadenas del ADN, Entre mas larga requiere de una fuerza menor para la rotula.
Fuente de ácido nuleico
El ADN/ARN se logra obtener de cualquier célula o vrus que la contenga
Fuentes posibles
Lisis de la célula
Separación
Purificación
Precipitación
Lavado
Disolución
Extracción del ADN por la técnica fenol-cloroformo
se usa en la lisis total de las células y sus diferentes etructuras subcelulares usando detergentes para la eliminación de proteinas por medio su extracción y la de componentes lipídicos con solventes orgánicos
Dejando al ADN puro y listo para su separación por medio de la precipitación en soluciones alcohólicas
Lisis de las células y liberación del ADN
:check: homogeneización del tejido y lisis con dtergentes con capacidad de romper la mebrana celular y nuclear
:check: liberar el ácido nucleico de las células de donde se extrae el ADN
:check: es un procedimiento critio y debe ser lo suficientemente agresivo para lograr la fragmentación del tejido y romper la membrana celular sin dañar el ácido nucleico
Disgregación del tejido y homogenización
se realizan en un BUFF Er de lisis, que contien sales, detergente y proteinasa k, que liberan el ADN de las histonas
La encubación con la enzima
se realiza a 65° por 2 horas.
El ADN la homegeneización se realiza en homogeneizador manual para evitar la rotura mecánica : :check:
El ARN se emplea en un homogeneizador eléctrico que gira de 200 a 1000 rpm :check:
Elección de metodo de extracción:
Organismo origen del ácido nucleico
:red_cross: mamíferos :red_cross:plantas :red_cross: procariontes o virus
Tipos de ácido nucleico que se va a extraer
:check:ADNss :check:DNAds :check: ARN total :check:ARNm :check: ARNr
Fuente del ácido nucleico
:green_cross: cultivo celular :green_cross: tejido :green_cross: sangre :green_cross: expectoracíon :green_cross: suero :green_cross: orina :green_cross: Líquido cefalorraquideo, etc.
Técnica en que se utilizará el ácido nucleico extraído
segun el uso del ácido nucleico : :check:requerimientos de rendimiento :check: pureza y tiempo de extracción
Metodologías: :red_cross: retrotranscripción :red_cross: PCR :red_cross: Clonación :red_cross: Northern blot :red_cross: Southern blot