Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Cost-effective multiplex real-time PCR chip system using open platform…
Cost-effective multiplex real-time PCR chip system using open platform camera
Material
Multiplexed 4 channel real-time PCR
2-2. PCR Chip
Chamber
얇고 넓다.
카메라로 밝기 측정하기 용이하다.
광학적으로 투명하다
Black matte PCB
heater pattern
보다 간단하게 고속 PCR 열 순환 가능
thermistor
2-3. Optic
Excitation unit
white? LED
PCR chip의 chamber를 정면으로 조사
excitation filter
Emission unit
emission filter
The color band is determination by combination of LED and excitation filter, emission filter detect effectively fluorescence HEX, ROX, CY5 and FAM
linear stepper motor
선형 레일로 인해 평행으로 4개의 필터를 움직이며, PCR chip과 평행
Detection unit
IMX 298
open platform camera
chamber를 정면으로 바라보고 있음
2-1. 전체 구조 설명
micro controller(Adafruit QT Py M0)
fan
excitation unit
emission unit
Method
3-1. Image processing + ROI
3-2. Experiment
형광 검출 성능 실험
해당 DNA 가 최대 증폭되었을때를 가정하여 각형광에 대해 2 pico mole/36㎕의 dye solution으로 실험
Single dye 실험
각 타겟 형광(FAM, HEX, ROX, CY5)의 dye solution 만 넣고 실험 & DDW
다중 형광에 대한 Crosstalk 성능 실험
각 타겟 형광을 제외한 형광 모두를 dye solution 주입하고 실험
& 모든 형광 dye solution 주입하고 실험
DNA 증폭 실험
시약 조성(36µl)
CT DNA
Primer
Master mix
Nuclease free water
PCR 시스템
총 40 Cycle
Pre-incubation : 50℃ for 2min
Pre-heating : 95℃ for 10min
40cycle(each) : 95℃ for 15s and 60℃ for 1min
Chamber의 밝기는 매 cycle의 65도 annealing 단계의 마지막 2초에서 camera로 측정
FAM 만 실험
4.Result
형광 검증 실험
Gain, Relative gain 구해서 비교
바이오메듀스 의뢰해서 4color interference data 첨부
증폭 실험
이미지 밝기 평균으로 커브그리기
photodiode 커브와 비교
Ct 값 구해서 비교
바이오메듀스 의뢰해서 CT/NG 실험 추가 (2 color)
filter wheel 실험: 정밀도 등
Intorduction
Polymerase chain reaction(PCR) is a technique that amplifies the target DNA. It is a im-portant part of modern diagnostic medicine that can diagnose diseases with a small amount of DNA.
필요성 및 문제점
기존 PCR
Generally expensive and only possible in hospitals or laboratories
POCT 기능의 요구
solving
miniaturization and price reduction are essential
using pcr chip
It was possible to easily obtain a low-cost, high-performance open platform camera that can be used for fluorescence detection for POCT PCR equipment
설계의 복잡함
논문의 목적
cost-effective multiplex real-time pcr
4개의 형광 다중화
측면 측광 방식
광학 부피 최소화
간단하고 쉬운 열순환 구조
pcr chip 사용