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CITOGENETICA e metodica FISH - Coggle Diagram
CITOGENETICA e metodica FISH
CITOGENOMICA
approccio all’analisi dei cromosomi a cavallo fra la citogenetica classica (analisi della forma e numero dei cromosomi) e l’analisi molecolare genetica pura
Con il microscopio ottico, come vedremo, è possibile identificare alterazioni nei geni e apprezzare l’intera
struttura di un tratto di DNA,
IBRIDIZZAZIONE
MOLECOLARE
sfrutta le proprietà delle due emieliche del DNA
di dissociare nelle due singole catene e di riassociare in vitro senza consumo di energia per complementarità.
alta temperatura->denaturazione
l’appaiamento fra catene di acido nucleico derivanti da due sorgenti differenti
stabilire l’omologia fra due specie o tessuti
verificare se una determinata sequenza di un gene sia presente nel genoma di un individuo
IBRIDIZZAZIONE IN FLUORESCENZA
non viene effettuata in provetta
preservandone l’integrità strutturale in cui si trovano (cromosomi, tessuto istologico, nuclei)
tratto di DNA marcato
le due emieliche sono sospese in soluzione
L’ibridizzazione viene rilevata al microscopio ottico con un’emissione di colore rosso da parte dei cromosomi.
verificare la perdita, la duplicazione o
l’amplificazione di un segnale.
FLUORESCENCE
ACTIVATED CELL
SORTER (FACS)
cell sorter separa i singoli cromosomi di una cellula, i quali vengono fatti fluire in un capillare uno alla volta e, in base all’emissione di fluorescenza, un laser e un dispositivo elettromeccanico riconoscono e suddividono i singoli cromosomi in provette differenti. Dai cromosomi viene estratto il DNA che viene poi marcato e analizzato.
CARIOTIPIZZAZIONE MULTICOLOR
mediante FISH
effettuata con due o più fluorocromi
identificare ciascuna delle coppie di omologhi in differenti colori o sequenze di colori
tecnologie del sequenziamento ad alta processivitá che sequenziano il genoma
NEXT GENERATION
SEQUENCING.
si basa su un microchip, grande quanto un
francobollo