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CROMATOGRAFIA - Coggle Diagram
CROMATOGRAFIA
CLASSIFICAÇÃO
MÉTODO
-
-
TIPO SUPORTE
Planar
-
Fase estacionária
- líquido
- sólido
- fase ligada
-
-
MECANISMO
SEPARAÇÃO
-
-
-
-
Afinidade
- específica
- usado na análise de enzimas
conformação espacial muit especif
,ligante FE ,e liga com grupo
especif da enzima
Cromatografia
líquida
CARACTERISTICAS
COLUNAS
rápidas
- L: =3-10 cm
- D=2-6 mm
- Q=1k -5k uL/min
- partícula:=3 um
convencional ou
analítica
- L: =5-30 cm
- D=2-6
- Q=1k -3k uL/min
- partícula:= 3 -5 um
-
capilares
- L: =1-100 m
- D=0,01-0,5 mm
- Q=0,1 -20 uL/min
- partícula:=1 e 3 um
preparativas
- L: =maior 20 cm
- D=maior 10 mm
- Q=maior 1k uL/min
- partícula:= maior 10 um
GERAIS
- particulas muito finas( 3 a 10um)
- comprimento (L) = 5 e 30 cm
- Diâmetro interno: 1 a 5 mm
- revestimento externo: aço ou plástico
- suporte :sílica
- FE: composto orgânico química ou
fisicamente ligados ao suporte
FASE
FASE NORMAL
- FE: +polar
- FM: +apolar
(baixe e média polaridade)
hexano/clorofórmio/acetonitrila
tetrahidrofurano/isopropanol/metanol
- solutos mais apolares saem primeiro
- ↓ polaridade fase móvel: ↑ T retenção
- ↑ polaridade fase móvel: ↓ T retenção
- aplicação: subst insolúvel em água
(lpídios/hidrocarbonetps) e separação isomeros
- estabilidade da coluna
- capaz solubilizar muitas substânc orgânicas
- aplicável a amostras incompatíveis c/ água
- versatildade satisfatória
- ruim p/ separar compostos iônicos
- eluição +demorada
- baixa resolução
- custos elevado solventes ôrgan
- maio tendência formação caldas(distorção pico)
FASE REVERSA
- FE: +apolar
- FM: +polar
( média/alta polaridade)
água /acetronitrila/metanol/tetrahidrofurano
tetrahidrofurano/isopropanol/metanol
- solutos mais polares saem primeiro
- ↑ polaridade fase móvel: ↑ T retenção
- ↓ polaridade fase móvel: ↓ T retenção
- tanto composto hidrofílicos como hidrofóbicos
- ampla gama aplicações
- maior reprodutividade
- água pde ser utilizada como FM
- metanol e acetonitrila são fácil obtenção
- ordem eluição previsível
- eluição em gradiente facilitada
- menor ocorrência adsorção irreversível
- ñ apresenta desvantagem significativa
Tamanho
partícula FE
-
UPLC
(ultra eficiência)
- maior pressão requerida
- +efeciênte que HPLC
- n° pratos maior
ELUIÇÃO
ISOCRÁTICA
- composição FM = CONSTANTE
- pde ser mistura= proporção é contante
Gradiende
- Composição FM: variável
- reduz tempo de análise
DETECTORES
TIPOS
fluorescência
emissão molecular
Alta sensibilidade
0,001-0,01 ng
espalhamento de luz
partículas sólidas( partir evaporação
solventes)
solutos forma sólida( responsáveis p/
espalhamneto de luz
sensibilidade intermediária
0,1-1 ng
-
-
-
espectrômetro de massa
sensibilidade intermediária
0,1-1 ng
-
-
-
-