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基因编辑策略总结 - Coggle Diagram
基因编辑策略总结
席师兄的策略（不能用，因为策略不对）
给我了两个gRNA质粒（SPCas9）UP-3, Down-2, 我已Sanger-seq确定序列，根据他的数据显示这两条gRNA 具有切割效率。
Donor序列 给我的是PSK-SEAP&mcheery 其中含Down-2的切割序列。
问题1 是 Down2 这个gRNA 在donor 一侧同源臂上会切两次？
问题2 是 Down-2只在基因组上切割1刀
问题3 是 那怕只切割1次 那同源臂的设计怎么不是从切割位点开始？
我之前的策略（gRNA可以使用，但是donor不能使用）
用UP-3 gRNA 相当于这个我不用构建了，去在基因组上切两刀。
我的构建过程中 donor模拟现实SEAP 不会表达 可能发生了移吗， 所以我的Donor不能用
也就是说要用心的比如师兄的SEAP和mcherry在一起的D的donor 进行构建 然后电转细胞
现在的策略
现在Donor序列表征结束 可以正常表达SEAP和GFP 正在整合到最终Donor质粒上
但是对应的位点SaCas9 结果显示无切割效率
做实这个结论
构建报告基因的SaCas9 质粒
经过证明无编辑效率
构建此位点的spCas9质粒
经过证明无编辑效率
最新的策略
用UP-3 gRNA序列 好处是有实验结果证明其是可以切割的（自己也要做实验证明一下）
用现在有的Donor 序列。