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Biotecnología del ADN de combinación en el campo de la medicina
PROYECTO GENOMA HUMANO
Identificación de secuencias de nucleótidos normales y mutantes en el ADN,
diagnóstico prenatal de enfermedades genéticas y tratamiento con terapia génica.
Existen tres técnicas: endonucleasas de restricción, clonación del ADN y sondas
GENOMA HUMANO
contiene 3000 millones
pares de bases
Codifican 20000 25000 genes localizados en 23 cromosomas en el genoma haploide
FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN
Especificidad de las endonucleasas de restricción
Reconocen segmentos cortos de ADNdh
● Las secuencias son diferentes para cada enzima de restricción.
● Son palíndromos
● Exhiben una simetría rotacional doble.
● La secuencia se mantiene igual
Nomenclatura
Enzima de restricción.
● Se nombra por el organismo que se aisló.
● 1ra letra del genero de la bacteria.
● 2 letras siguientes del nombre de la especie de la bacteria.
● Tipo de cepa
Extremos cohesivos y romos
Las enzimas de restricción digieren el ADNdh
● Producen un grupo 3’-hidroxilo en un extremo
● Y un grupo 5’-fosfato en otro
● Algunas endonucleasas de restricción, como la Taq l, forman cortes
escalonados que producen extremos «cohesivos»
● Otras endonucleasas de restricción, como la Hae III, producen fragmentos
con extremos «romos» que son de doble hebra y por tanto no forman enlaces
de hidrógeno entre sí.
Sitios de restricción
Endonucleasas de restricción rompen el ADNdh en fragmentos de tamaños
diferentes.
● Reconoce una secuencia especifica.
● Produce muchos cortes en la molécula de ADN
CLONACIÓN DEL ADN
CLONACIÓN
molécula de ADN extraño en una célula que se está replicando
permite la clonación o amplificación (es decir, la producción de muchas copias idénticas)de
ese ADN.
VECTORES PROPIEDADES
Debe ser capaz de replicarse de manera autónoma dentro de una célula
hospedadora.
● Debe contener al menos una secuencia de nucleótidos específica reconocida por
una endonucleasa de restricción.
● Debe llevar al menos un gen que confiera la capacidad para seleccionar el vector,
como un gen de resistencia a antibióticos.
SONDAS
Las sondas se utilizan para identificar el clon de la genoteca o la banda de gel que contiene
el ADN diana.
ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN
Son enzimas bacterianas
● Enzimas de restricción
● Digieren el ADN de doble hebra (ADNdh) en fragmentos pequeños.
● Análisis del ADN
● Las enzimas de restricción de utilizan para obtener segmentos de ADN.
TRANSFERENCIA DE SOUTHERN
POLIMORFISMO DE LA LONGITUD DE LOS FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN
POLIMORFISMO
Es un cambio en el genotipo que puede no causar ningún cambio en el fenotipo, o
un cambio que no es perjudicial, aumenta la susceptibilidad a la enfermedad o
raramente provoca la enfermedad
Diagnóstico prenatal
hijo o un
pariente cercano previamente afectado, quizá deseen determinar la presencia de ese
trastorno en un feto en desarrollo
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Permite la síntesis de millones de copias.
● Amplifica secuencias de ADN de cualquier fuente.
ANÁLISIS DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
Permite analizar los productos de la expresión génica.
● El ARN mensajero y las proteínas