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ACIDOS NUCLEICOS Y PRUEBAS GENETICAS, DESNATURALIZACIÓN E HIBRIDACIÓN,…

- - - - La ocurrencia de tumores malignos constituye uno de los principales problemas de salud en el mundo. En México, han ocupado uno de los cinco primeros lugares como causa de muerte durante los últimos años. La primera conexión entre el cáncer y la genética se propuso a principios del siglo XX, y esta idea ha servido como una de las bases de la investigación sobre el cáncer.
    - - CICLO CELULAR
        
        El ciclo celular lo forman las fases G1, S, G2 y M y está acoplado al ciclo de control del crecimiento en el que existen señales de diferenciación celular y factores de crecimiento.
        
        La fase G0 por factores de crecimiento pasa a la fase G1, S, G2 y M para tener una división completa. Una vez que el estímulo del factor de crecimiento desaparece o por medio de factores de diferenciación, la célula regresa a la fase G0.
        
        El receptor se une a su ligando y la parte citoplásmica del receptor tiene actividad enzimática de cinasa de tirosina o de cinasa de serina-treonina.
        
        El receptor se une a su ligando y la parte intracitoplásmica del receptor se acopla a proteínas con actividad de cinasa de tirosina.
        
        El receptor se une a su ligando y la parte citoplásmica activa proteínas con actividad de GTPasa (proteína G).
        
        Genes supresores de tumor y oncogenes
        
        En general, la mitosis se puede regular de dos formas:
        
        Por genes que detienen la división celular y
        
        Por genes que promueven la división celular.
        
        La primera clase llamados genes supresores de tumores (oncosupresores), codifican proteínas que actúan deteniendo la proliferación o bien induciendo la apoptosis. Cuando una mutación del gen genera una proteína no funcional o impide su síntesis, la proliferación pierde su control o bien la apoptosis nunca tiene lugar, por lo que la proliferación es excesiva a menudo con acumulación de daños genéticos en las células.
  - - - Un molde o patrón de ADN de hebra simple.
        
        Un iniciador o primer de ADN de cadena sencilla.
        
        Nucleótidos (dNTP’s) para formar la nueva hebra de ADN.
        
        Enzimas importantes en los ácidos nucleicos
        
        Las enzimas llamadas ADN ligasas (por ejemplo, T4 ADN ligasa) catalizan la formación de enlaces fosfatos en el ADN de doble cadena y se pueden utilizar para unir fragmentos de ADN. Por ejemplo, los fragmentos de ADN que se han cortado con la enzima de restricción EcoRI se pueden pegar nuevamente al incubar los fragmentos con una ligasa.
        
        Extracción del ADN de las células
        
        Se puede utilizar cualquier célula nucleada como fuente de ADN. Aunque los eritrocitos no tienen núcleo, otras células sanguíneas, como los leucocitos, son una buena fuente de ADN. Algunas líneas celulares, como los linfocitos B transformados, también son una buena fuente de ADN.
        
        La extracción del ADN implica:
        
        Lisis de la membrana celular utilizando Tritón 100X u otro detergente.
        
        Centrifugación para obtener un botón y / lavado de los núcleos.
        
        Lisis de los núcleos usando Tween 20, u otro detergente como el duodecil sulfato de
        sodio.
        
        Remoción de las proteínas unidas al ADN con proteinasa K o con pronasa.
        
        Destrucción de la proteinasa K con calor.
        
        Precipitación del ADN con alcohol isopropílico o etanol absoluto.
- - - - En genética forense el estudio de las regiones polimórficas en el DNA humano, ha conducido al desarrollo de la tecnología que permite la identificación humana, con fines de exclusión de la paternidad, además de poseer una enorme importancia en crimininalística.
  - - - Cada nucleótido está integrado por un azúcar
        pentosa, una base nitrogenada y un grupo fosfato.
        
        En el ARN de ribonucletidos tienen el azúcar ribosa, mientras que los desoxirribunucleotidos
        contienen el azúcar desorribosa.
        
        Las bases nitrogenadas son las purinas adenina y guanina y las pirimidinas timina, citosina
        y uracilo.
    - - Contiene la información genética con la que se elaborarán las proteínas del organismo. El ácido desoxirribonucleico está formado por dos cadenas de desoxirribonucleótidos que se unen a través de las bases nitrogenadas: adenina con timina y citosina con guanina. Las dos cadenas de nucleótidos tienen una disposición antiparalela, pues en un extremo se encuentra la terminación del nucleótido 3’ mientras que en la otra está el extremo 5’.
        
        ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN
        
        Las endonucleasas de restricción (ER) son enzimas que cortan al DNA de doble hélice en una secuencia específica de pares de bases. Esas secuencias son palíndromas, es decir, se leen igual hacia delante en la hebra codificante que hacia atrás en la hebra no codificante. Por ejemplo, la enzima de restricción EcoRI, corta el DNA en la secuencia:
        
        Las ER son endonucleasas, por lo que el sitio de restricción aparece en el extremo de un fragmento de DNA, la enzima de restricción no lo reconocerá, de esta forma la enzima EcoRI no cortará la secuencia:
        
        5' GAATTCGACTGCCATA 3'
        3' CTTAAGCTGACGGTAT 5'