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Técnicas de diagnostico molecular - Coggle Diagram
Técnicas de diagnostico molecular
Análise de DNA
Pode ser feito em qualquer pessoa, desde crianças a adultos
Maneira mais comum é por meio da coleta de sangue periférico de 5 a 10 ml.
Para amostras menores, pode-se fazer a técnica através da gota de sangue, saliva, bulbo capilar, ou qualquer opção que se tenha para extrair o DNA
Eletroforese
É uma técnica que caiu em desuso, e atualmente é utilizada apenas como parte de uma técnica que possibilita diferenciar amostras.
A ideia da eletrorese é conseguir separar ou proteínas ou DNA em uma matriz em gel (agarose ou poliacrilamida) -> vai ser analisado o gel, no qual se tem bandas que estarão dispostas de maneira diferente (não são cromossômicas, são fragmentos de DNA ou proteínas)
Anemia Falciforme
Doença que se tem uma mutação de ponto, uma substituição de timina por adenina que gera mudança de proteína para valina e mudar a hemoglobina para formato de foice
Pode pedir eletroforese
Da proteína - pois são estruturalmente diferentes e isso vai fazer com que percorram de maneira diferente no gel
Do DNA - porque a valina tem peso molecular suficientemente diferente da glutamina para que a banda corra de maneira diferente.
Indivíduo que tem anemia falciforme só tem hemoglobina mutada (SS), pois a doença é autossômica recessiva e assim precisa ter mutação nos dois alelos
PCR - Reação em cadeia da polimerase
Técnica que vai amplificar sequências específicas de DNA a partir da colocação de primers, antes da análise por eletroforese. Foi a técnica que nos possibilitou extrair e analisar DNA de amostras pequenas (antes precisava-se de 5 a 10ml de sangue).
Indicação
Em situações que se precise amplificar regiões específicas de DNA, em que se irá se analisar um gene ou um pedaço de gene.
Na doença de Huntington em que já se sabe que a mutação está no exon 1, então não precisa analisar o gene inteiro para ver se a pessoa tem Huntington.
Clonagem de genes, análise de mutagênese, detecção de mutações, câncer, detecção de infecções bacterianas e virais, fingerprinting, na criminologia e ciência forense, testes de paternidade
No diagnóstico pré-natal é fundamental por aumentar a quantidade de DNA.
Vantagens
Técnica sensível que seleciona o que quer e depois aumenta o DNA para conseguir utilizá-lo -> Grande quantidade de DNA é obtida em pouco tempo
Custo não é alto
A amostra de DNA não precisa estar altamente purificada então pode usar restos biológicos
Permite sequenciamento de genes
Desvantagens
Precisa conhecer as sequências flanqueadoras, que são o que vem antes e depois de um gene que quer sequenciar, para pegar os primers e garantir que eles vão se ligar ali
Muito suscetível à contaminação - por exemplo cair saliva onde está sendo feito o processo, pode amplificar DNA do examinador e não o da amostra e gerar mistura e ainda mais confusão.
PCR-STR
Análise dos microssatélites, dos polimorfismos STR, é preciso comparar o tamanho daqueles polimorfismos e com isso tem-se tamanhos diferentes, sendo possível correr uma eletroforese e ver essas diferenças
Utilizada para ver a parte dos microssatélites mas também
para a parte de expansão de trinucleotídeos
Microssatélite não expande, então o número de repetições que o filho tem, tem que ter vindo da mãe ou do pai, pode ter algum errinho, por isso analisa vários locus de microssatélites.