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PRACTICA No. 9: PRUEBA DE COOMBS DIRECTO (AHD) - Coggle Diagram
PRACTICA No. 9: PRUEBA DE COOMBS DIRECTO (AHD)
Prueba directa de AGH
La prueba directa corresponde al tubo rotulado como “1” descrito en el numeral 9.4.3, subnumeral 1.
Preparación de eritrocitos sensibilizados al 5 % y la suspensión del control negativo
*Colocar en un tubo 1 gota de sangre O Rh (+) y 19 gotas de SSF. Dividir esta suspensión
en dos tubos A y B. El tubo B (0.5mL) se rotula como control negativo.
Por separado, en otro tubo colocar 0.5 mL de SSF y una gota de reactivo Anti D. Mezclar el tubo con el reactivo anti D con el tubo A e incubar por 15 min a 37 °C en el termobaño.
Al terminar la incubación, lavar 3 veces con SSF y resuspender el botón que se forma con 10 gotas de SSF. Estos eritrocitos sensibilizados también son llamados
células control de Coombs.
Preparación de las diluciones de la muestra problema
De la muestra del paciente, tomar una gota de sangre, colocarla en un tubo de ensaye y
rotular como “eritrocitos problema”. Lavar la gota de sangre tres veces con SSF.
Para el proceso de lavado: llenar el tubo 3/4 partes con SSF y centrifugar. (En la serofuga
durante un minuto, o en la centrifuga ordinaria a 1800 rpm durante 3 minutos), retirar el tubo de la centrifuga, decantar, resuspender el botón y volver a llenar con SSF, este
proceso se realiza tres veces.
Con el botón obtenido de la tercera lavada, realizar una suspensión al 5 % V/V (el botón
más 10 gotas de SSF).
Se rotulan 5 tubos:
A los tubos 1, 2, 4 y 5 se les agregan 2 gotas de AGH respectivamente.
Se agrega a los tubos rotulados del 1-3 una gota de suspensión de eritrocitos
problema y al tubo 4 una gota de eritrocitos control negativo y al 5 una gota del control positivo.
Retirar los tubos del termobaño y secarlos perfectamente. Colocarlos en la
centrifuga.
Extraer los tubos de la centrífuga (o serofuga) evitando agitarlos y observar si
existe aglutinación en el fondo del tubo.
Para facilitar la observación, agitar el tubo suavemente inclinándolo hasta que se desprenda el botón formado en el fondo del
tubo.
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(Si es serofuga las condiciones de operación serán de 15’’ y si es centrífuga convencional usar 1’/1800 rpm).
Incubar todos los tubos por 15 min a 37 °C en el termobaño.
Posteriormente se pasan dos gotas de la mezcla del tubo 2 al tubo 3.
Del tubo 3, se
toman dos gotas y se desechan.
1,2 y 3 corresponden al problema. El tubo 1 se deja sin SSF (este tubo solo contiene eritrocitos problema y el reactivo de AGH). A los tubos 2 y 3 se les agregan dos gotas de SSF.
El tubo 4 al control negativo
El tubo 5 al control positivo.