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ACIDOS NUCLEICOS Y PRUEBAS GENETICAS, DIAGRAMA DE FLUJO, DETECCION DE…

- - - - Fundamento teórico
        
        Apartir de 1953 James y Francis reportaron el descubrimiento de la estructura molecular del ADN, es una herramienta fundamental en biomedicina
        
        El manejo de genes humanos ha permitido el estudio de la constitucion genetica del hombre, tambien utilizo los genes como marcadores lo que ha facilitado el diagnostico prenatal o la deteccion de portadores sanos de enfermedades geneticas
        
        La carecterizacion de nuevos oncogenes ha permitido comprender los cambios estables que se presentan en el genoma durante el cancer, y tambien para la deteccion de esta enfermedad
        
        Diagnostico molecular de las enfermedades infecciosas permite conocer las diferencias o similitudes, tambien en la genetica forense el estudio de las regiones polimorficas en el ADN
      - LOs acidos ribunucleico y desoxirribonucleico son las biomoleculas responsables de resguardar la informacion genetica del organismo
        
        En el ARN de ribonucletidos tienen el azucar ribosa, mientras que los desoxirribunucleotidos contienen el azucar desorribosa
        
        LAs bases nitrogenadas son las purinas adenina y guanina y las pirimidinas timina citosina y uracilo
        
        Al formar las cadenas cada nucleotido se une a otro a traves de un enlace fosfodiester constituido entre el OH del carbono 3 del azucar y el fosfato
        
        El ADN contiene la informacion genetica con la que se elaboraran las proteinas del organismo el acido desoxirribonucleico esta formado por dos cadenas de desoxirribonucleotidos el cual esta por cadenas nitrogenadas
    - - Endonucleasasde restriccion
        
        Son enzimas que cortan al DNA de dble helice en una secuencia especifica de pares de bases las cuales son palindromas
        
        Depende de la enzima de restriccion los extremos que se generan despues del corte son planos o tienen una protuberancia en el extremo 5 o 3
        
        5´GAATTCGACTGCCATA 3´ Y LA 3´CTTTAAGTGACGGTAT 5´
        
        La desnaturalizacion y la hibridacion
        
        Rompe los enlaces de hidrogeno que manyienen unidas las bases y por lo tanto el ADN de doble hebra
        
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      - Las sondas son fragmentos sintéticos de ADN de hebra simple (oligonucleótidos) que tienen
        una longitud de 12 a 26 nucleótidos
        
        Generalmente una hebra de ADN
        se une a un soporte sólido, por ejemplo, una membrana, para incrementar la velocidad, lo
        que ayuda a detectar la reacción de hibridación.
        
        Detección de la hibridación. Si la sonda está marcada la hibridación puede detectarse con
        la marca. Las sondas se pueden marcar con fósforo radioactivo (P32)
  - - - Un molde o patrón de ADN de hebra simple. Las polimerasas sintetizan un producto
        cuya secuencia es complementaria a dicho molde.
      - Un iniciador o primer de ADN de cadena sencilla. Es un oligonucleótido sintético que
        se hibrida o se une al molde
      - Nucleótidos (dNTP’s) para formar la nueva hebra de ADN.
    - - Las enzimas llamadas ADN ligasas (por ejemplo, T4 ADN ligasa) catalizan la formación de
        enlaces fosfatos en el ADN de doble cadena y se pueden utilizar para unir fragmentos de
        ADN
        
        Las cinasas como la T4 polinucleótido cinasa agregan fosfatos en los extremos 5' de los
        fragmentos de ADN,
        
        La transferasa terminal agrega nucleótidos en los extremos 3' de las moléculas de ADN y
        hace una cola de una sola hebra.
      - Extracción del ADN de las células
        
        Se puede utilizar cualquier célula nucleada como fuente de ADN. Aunque los eritrocitos no
        tienen núcleo, otras células sanguíneas, como los leucocitos
        
        Lisis de la membrana celular utilizando Tritón 100X u otro detergente.
        • Centrifugación para obtener un botón y / lavado de los núcleos
        • Lisis de los núcleos usando Tween 20, u otro detergente como el duodecil sulfato de
        sodio.
        
        Extracción de ADN en papel FTA
        
        Esta técnica es útil para la toma de muestras en condiciones de campo, dado que permite
        transportar la muestra sin necesidad de refrigeración
        
        además que el ADN se conserva
        estable por varios años (siempre y cuando se almacene libre de humedad).
- - - - Lisis de nucleos
        
        Agecion de agentes caotropicos
        
        extraccion organica
        
        separacion de la fase aguda
        
        precipitacion con etanol y cloroformo
- - - - Ciclo celular
        
        Las células que conforman el tejido normal responden a estímulos y señales tanto externas
        como internas que les indican si deben proliferar o detener su división
        
        El ciclo celular es un proceso fundamental en todos los organismos, eucariontes y
        procariontes. Es la rutina metabólica que realiza una célula para multiplicarse por medio de
        una red de eventos bioquímicos y moleculares
        
        El ciclo celular lo forman las fases G1, S, G2 y M y está acoplado al ciclo de control del
        crecimiento en el que existen señales de diferenciación celular y factores de crecimiento.
      - Las mutaciones, presentes en las células cancerosas, que provocan la aparición de las
        características tumorales afectan genes cuyos productos proteicos
    - - Caracteristicas de la expresion de los genes oncosupresores
        
        La pérdida de la función de un gen oncosupresor sólo se produce cuando han mutado los dos alelos
        
        Es decir, la forma mutada de un gen oncosupresor
        se expresa con carácter recesivo
        
        tipos de protooncogenes
        
        Los factores estimuladores del crecimiento celular.
        
        Los receptores de factores de crecimiento o de hormonas,
        
        Las proteínas citoplasmáticas que intervienen en los sistemas de transducción
        
        Los factores de transcripción que controlan la expresión de los genes
        
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      - Los genes oncosupresores codifican proteínas que actúan en distintos puntos de las rutas
        de señalización
        
        Los factores inhibidores del crecimiento celular
        
        Los receptores de estos factores inhibidores o de hormonas
        
        Las proteínas citoplasmáticas que intervienen en los sistemas de transducción
        
        Los factores de transcripción que dirigen la expresión de genes
        
        Las proteínas que frenan el ciclo celular
- - - - El ADN está localizado dentro del núcleo de las células eucarióticas, rodeado de
        proteínas, histonas y organizado en cromosomas
        
        El aislamiento del ADN, es el primer paso en cualquier análisis genético. Dada la
        complejidad de esta molécula, los ácidos nucleicos
  - - - Primero, el ADN que se quiere amplifica 2. Los cebadores hibridan al ADN de cadena sencilla. 3. A la mezcla de reacción se le añade una ADN polimerasa resistente al calor
  - - - sólo este determinada por el
        tamaño de la molécula. La separación de los fragmentos de ADN d
        
        ADN que se requiere separar.
        Una vez separadas las moléculas de ADN se visualizan normalmente