Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Isolasi DNA, Tipe Ekstraksi DNA, Pengertian, Pendahuluan, Tujuan, Sumber,…

- - - - Diagnosis penyakit
      - DNA sequencing
      - Teknik kloning
      - Genetically modified organisms (GMO)-agriculture, pharmaceutical
      - DNA profiling
      - Analisis kehalalan
    - - tanaman, hewan, manusia
    - - Proses pengambilan DNA dari sel melalui proses: fisik, biologis, kimiawi
    - - Precipitation
        
        Protein Precipitation
        
        DNA precipitation
        
        Purification
        
        Cell Lysis
        
        Mechanic distruption
        
        Chemical Lysis
        
        Enzymatic lysis
      - Prinsip
- - - - Tahapan
        
        Washing Biodrop µLite dengan nuclease-free water 1µL (2x)
        
        Blanko dengan buffer PE 1µL
        
        Diambil DNA isolat 1µL dari pendingin -20ºC dan diteteskan ke Biodrop µLite
        
        Dibaca absorbansi pada lambda 260 nm dan 280 nm
        
        Setiap pergantian sampel, Biodrop µLite dicuci dengan nuclease-free water
    - - Kuantitatif
        
        Menganalisis kemurnian DNA menggunakan alat
        
        spektrofotometri
        
        uv base
        
        fluorancent base
        
        Tetapan
        
        UV light at Max at 260 nm
        
        O.D. at 260 nm for double-stranded DNA = 50 ng/ul of dsDNA
        
        O.D. at 260 nm for single-stranded DNA = 20-33 ng/ul of ssDNA
    - - kualitatif
        
        Menganalisis kemurnian DNA menggunakan alat
        
        spektrofotometri
        
        gel elektroforesis
        
        Tetapan
        
        A260/A230 < 1,8 : DNA terkontaminasi oleh pelarut
        organik (etanol, kloroform)
        
        A260/A280 1,8-2,0: Kualitas DNA baik (murni)
        
        A260/A280 < 1,8 : DNA terkontaminasi oleh protein
        
        A320>> : kekeruhan (turbidity) pada sampel, yang
        dapat mengganggu pembacaan absorbansi DNA
        
        Kemurnian DNA= (A260/A280)=(A260-A320)/(A280-A320)
    - - Integritas
      - Kualitas Baik
        
        Gambar (pita) DNA tunggal
        
        Tidak terlihat smears
        
        Tidak terkontaminasi RNA, garam, protein
        
        Kualitas Buruk
        
        Terlihat smears
        
        Terkontaminasi RNA, garam, protein
- - - - ALAT
        
        eppendorf tube, Beaker glass, thermometer, vortex, centrifuge, NucleoSpin® Filter (ungu), kolom, NucleoSpin® Plant II Column (hijau) hot stirrer plate
      - BAHAN
        
        sampel serbuk daun, dan satu set pereaksi dalam kit “NucleoSpin Plant II (Machery-Nagel)” yang terdiri dari lysis buffer PL1, binding buffer PC, washing buffer PW1 dan PW2, dan elution buffer PE (5 mM Tris/HCl, pH 6,5)
    - - ALAT
        
        lemari pendingin -20°C, spektrofotometer Biodrop µLite.
      - BAHAN
        
        larutan DNA isolat dan sterile water for injection.