Posteriormente à avaliação dos sintomas da ferrugem, aproximadamente 15 dias após a inoculação, a primeira folha trifoliolada das plantas RC3F2 foi inoculada com uma suspensão contendo 1,2 x 106 conídios/mL da raça 89 de C. lindemuthianum, com o auxílio de um pincel. Após a inoculação e rápida secagem ao ar, as plantas foram incubadas por cinco dias na câmara de nevoeiro (20 +1°C e >95% de umidade relativa), sob fotoperíodo de 12 horas. Em seguida, foram novamente transferidas. para a casa de vegetação (20±5°C), onde permaneceram até serem avaliadas. A avaliação dos sintomas da antracnose foi feita com base na escala de 1 a 9, descrita por Pastor-Corrales
Para os propósitos deste trabalho, apenas as plantas com nota 1 (imunes) foram consideradas resistentes.
Foram realizadas análises de segregação para testar a hipótese de herança monogênica dominante quanto à resistência à ferrugem e à antracnose, bem como para testar a hipótese da segregação independente dos genes de resistência às duas doenças. Para isso, os números observados de plantas resistentes e suscetíveis foram comparados com os teóricos esperados pelo teste do x². Para determinar a distância genética entre os genes de resistência à ferrugem e à antracnose, foi feita a análise de co segregação utilizando o programa MAPMAKER.EXP 3.0