Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Analisis Protein dengan Elektroforesis, Pengertian, Tujuan, Faktor yang…
Analisis Protein dengan Elektroforesis
Memisahkan molekul-molekul bermuatan pada suatu medium gel yang dialiri medan listrik berdasarkan ukuran berat molekul dan/atau muatan listriknya.
Elektroforesis
UV transiluminator dan BioDocAnalyze Biometra
Microwave
Elektroforesis merupakan suatu teknik yang digunakan untuk pemisahan, identifikasi, dan purifikasi molekul biologis seperti DNA, RNA, dan protein.
Tegangan listrik pada elektroforesis
Tempratur pada rentang 4-30 derajat C
Ukuran DNA
Larutan buffer
adanya EtBr
Buffer TAE 1X
Sampel hasil PCR atau PCR-RAPD
Agarosa
Ethidium bromide 20 µg/ml
sampel hasil PCR dan marker di injeksikan pada well
elektroforesis dijalankan pada 70-100 volt
gel di tuang dengan TAE 1x hingga semua well terendam
gel hasil elektroforesis diwarnai dengan di rendam pada larutan ethidium bromide selama 20-30 menit
setelah gel dingin(mengeras),sisir di lepaskan dari gel,kemudian gel di masukan ke dalam cetakan
gel yang telah di warnai di cuci dengan di rendam air selama 20 menit
larutan gel di tuang pada cetakan,kemudian diberi sisir untuk pembuatan well dan di biarkan mengeras
hasil elektroforesis diamati menggunakan GelDoc Analysis Biorad
pemanasan di selingi pengocokan hingga di dapatkan larutan gel yang jernih,di diamkan sampai agak hangat
pembuatan gel agarosa 1,5% dengan menimbang gel agarosa 0,6 gram + 40 ml TAE 1x di panaskan dengan microwave
Gel Agarosa adalah suatu bahan semi-padat berupa polisakarida yang diekstraksi dari rumput laut
1.Tentukan konsentrasi atau presentase agarose yang dibutuhkan dan hal ini tergantung dari ukuran fragmen DNA yang dianalisis.
2.Pilih tipe agarose yang digunakan. Kebanyakan tipe yang digunakan adalah standart agarose. Misalnya telah ditentukan akan dibuat 2% gel agarose dalam volume 200 ml 1x buffer TAE, maka jumlah agarose yang akan ditimbang yaitu: 2 gram/100ml x 200ml=4 gram.
3.Tempatkan 4 gram agarose ke dalam labu erlenmeyer dan isi dengan larutan 1X Buffer TAE sampai volume 200ml, kemudian kocok sampai merata.
4.Panaskan dalam microwave sampai mendidih sampai larutan menjadi jernih.
5.Didinginkan agarose kira-kira sampai 600C dan tambahkan 5µl ethidium bromide (10mg/ml) dan campur hingga merata.
6.Setelah itu larutan dituang ke dalam tray dan pasang well-forming combs, tunggu kurang lebih 30 menit atau sampai gel mengeras. Lepaskan well-forming combs secara perlahan-lahan dan gel agarose siap digunakan untuk elektroforesis.
Pita hasil elektroforesis dapat diamati setelah gel diberi penampak dengan menambahkan zat
warna seperti ethidium bromide. Ethidium bromide mampu memberi warna pada pita karena mampu menginterkalasi (menyisip ke dalam) bagian tertentu pada DNA. Penambahan zat warna pada gel dapat dilakukan sebelum atau sesudah elektroforesis dilakukan. Pita yang telah diwarnai dapat dilihat di bawah sinar ultraviolet
Pengertian
Tujuan
Faktor yang mempengaruhi kecepatan migrasi DNA
Alat
Bahan
Pegertian Gel Agarosa
Prosedur Kerja
Pembuatan Gel Agarosa