Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
ANALISIS PROTEIN DENGAN ELEKTROFORESIS, western blotting - Coggle Diagram
ANALISIS PROTEIN
DENGAN
ELEKTROFORESIS
Metode Dasar Isolasi Protein
Ekstraksi Protein
Pada proses ini bertujuan untuk memisahkan komponen protein dari bahan utamanya. Ekstraksi protein dilakukan dengan menggunakan metode lisis.
Salting Out
Pada proses ini dilakukan purifikasi menggunakan metode fraksinasi, larutan protein akan ditambahkan garam hingga larutan tersebut menjadi jenuh sehingga terjadi pengendapan.
Elektroforesis (SDS-PAGE)
Pada proses ini protein akan dipisahkan sesuai dengan berat molekul dan affinitas tertentu dengan menggunakan medan listrik dan gel poliakrilamida yang bertujuan untuk memisahkan protein dengan koloid.
Tahap Isolasi Protein
penggumpalan (koagulasi)
pemisahan parikel tertentu melalui sentrifugasi
pada pemisahan, partikel yang densitasnya lebih tinggi daripada pelarut turun (sedimentasi) dan partikel yang lebih ringan mengapung ke atas.
proses sentrifugasi akan memisahkan bagian debris dengan makromolekul protein sel.
lisis sel
metode akan berbeda pada setiap jenis
sampel mahluk hidup yang digunakan.
metode lisis lainnya dapat dilakukan secara fisik dengan kombinasi metode pengenceran atau dialisis untuk menghilangkan enzim kontaminan.
pada proses lisis membran sel dan organel akan dihasilkan senyawa kontainan fenolat dan proteinase yang dapat mendegradasi protein
https://www.youtube.com/watch?v=ZWw_-H1cMvk
molecule detected : protein
gel electrophoresis : gel polycrylammide
probes : antibody promer
blotting method : transfer melalui elektrik
detection system : chemiluminescent colorimetric
gel pretreatment : -
Prosedur Praktikum
Metode Pengendapan TCA-aseton
Metode Tris-aseton-fenol
Metode Pengendapan Trizol
Alur Kerja Analisis Protein Secara Umum
Analisis Kualitatif
Elektroforesis 1D/2D : Imunoelektroforesis, Uji reaksi berbasis warna: Biuret, Dradford, Ninhidrin, Xanthoproteic
tes asam
Analisis Kuantitatif
Spektrometri massa : Penyerapan pada 280 nm , metode : Metode Biuret ,Metode Lowry ,Metode BSA,Metode Bradford
Pemurnian Protein
Sentrifugasi diferensial : Presipitasi garam diferensial,Presipitasi pelarut diferensial,Elektroforesis preparatif (1D
& 2D),Kromatografi kolom
Isolasi Protein
berbasis kimia: TCA, Fenol, TriZol,
t-butanol, Kit berbasis kolom
Analisis Kualitatif Protein
2 D Elektroforesis
Kekurangan : biaya teknik ini jauh lebih tinggi dibandingkan elektroforesis 1D
metode ini meningkatkan resolusi pemisahan protein
titik iso-elektrik protein bergantung pada pH dimana protein tersebut netral
Memisahkan protein berdasarkan 2 sifat titik isolistrik protein dan berat molekul
https://youtu.be/FHvblg338Gg
1 D Elektroforesis
pemisahan protein terutama dilakukan : elektroforesis gel polikrilamida
metode pemisahan berdasarkan sifat berat dan muatan molekulnya
molekul dengan berat rendah bermigrasi lebih cepat dalam gel dibandingan dengan protein dengan berat molekul tinggi
Pengertian
Isolasi protein adalah suatu tahapan yang paling penting dalam penelitian molekuler untuk mengetahui fungsi protein sebagai hasil ekspresi proses sintesis DNA.
Tujuan
Tujuannya untuk mendapatkan protein dengan tingkat kemurnian yang tinggi sehingga dapat dilakukan analisa lebih lanjut, seperti mengetahui karakteristik khas protein tersebut, termasuk ukuran, bentuk, muatan, hingga fungsi.
western blotting
