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MÉTODOS DE DETERMINACIÓN EN EL LABORATORIO DE COMPUESTOS NITROGENADOS NO…
MÉTODOS DE DETERMINACIÓN EN EL LABORATORIO DE COMPUESTOS NITROGENADOS NO PROTEICOS
Determinación de amonio
.
Muestra
Plasma con EDTA K2 o K3
Libre de hemolisis
Lipemia
Colocar en hielo y centrifugar
No usar torniquete
Volumen 2ml
Condiciones
Llenar los tubos completamente y conservar permanentemente bien cerrados.
Realizar el test dentro de 60 minutos tras la venopunción o congelar el plasma separado.
Técnica
Enzimatico con glutamato-deshidrogenasa
Condiciones del paciente
No fumar antes de extraer la muestra
No tomar medicamentos ya que pueden afectar los resultados
El ciclo de la urea convierte el amonio en urea, el defecto en alguno de los pasos del ciclo causa hiperamonemia.
Las manifestaciones clínicas de la hiperamonemia son secundarias a la toxicidad del amonio, y su gravedad depende de la intensidad de la alteración bioquímica.
Letal en recién nacidos
Afecta a adultos
Valores de referencia
Mujeres: 18.7‑86.9 µg/dL
Hombres: 27.2 – 102 ug/dL
Las concentraciones elevadas de amoniaco
Diagnóstico de la insuficiencia o encefalopatía hepáticas como consecuencia de hepatopatías avanzadas tales como la hepatitis viral o la cirrosis.
Determinación de urea en suero
Recolectar muestras de sangre
tubo con tapa
roja o amarillo
Obtener el suero
marcamos tres tubos
Blanco (Tubo 1)
1ml de reactivo A + 1 ml de reactivo B
Estándar (Tubo 2)
1ml de reactivo 1 + 25 ul de estándar (mezclar) + 1 ml de reactivo 2
Mezclar por inverción e incubar 15min a temperatura ambiente
Llevar al espectrofotómetro para analizar
Muestra (Tubo 3)
1 ml de reactivo 1+ 25ul de suero+ 1 ml de reactivo 2
Evitar hemólisis
La urea en suero es estable hasta 7 dias a 2-8 °C
No es necesario el ayuno
Determinación de acido úrico en sangre
Fundamento
La bilirrubina indirecta necesita solubilizarse en un desarrollador
La bilirrubina directa (BD) reacciona con el diazonio.
Utiliza
El diazorreactivo reacciona con la bilirrubina unida àc glucurónico (BD) ya la unida a la albúmina (BI), obteniedo asi la bilirrubina total (BT)
Muestra
Suero o plasma protegido de la luz
Técnica
Luego de 5 minutos, leer a 520- 550 nm. llevando a cero el aparato con agua destilada
Mezclar por inversión
El color es estable por dos horas.
Valores de referencia
Bilirrubina Total 0,2 - 1,0 mg/dL
Bilirrubina Directa 0.0 - 0,2 mg/dL
Bilirrubina indirecta 0.2 - 0,8 mg/dL
Cálculos
AB: absorbancia del tubo blanco=
· ABD: absorbancia del tubo BD=
· ABT: absorbancia del tubo BT=
• Bilirrubina total mg% - (ABT - AB) x F=
• Bilirrubina directa mg% - (ABD - AB) x F=
• Bilirrubina indirecta - Bilirrubina total - bilirrubina directa= (El factor se obtiene realizando una curva de calibración F-10mg/dL)
Aplicación Clínica
La determinación de la concentración de BD y BT en sangre proveen información útil para el diagnóstico del tipo de ictericia.
Determinación de aminoácidos en plasma
Forma en que se realiza el examen
La mayoría de las veces, se extrae sangre de una vena ubicada en la parte interna del codo o la parte posterior de la mano.
Para los bebés o los niños pequeños, se puede utilizar un instrumento llamado lanceta para pinchar la piel
Se recolecta la sangre en un tubo de vidrio pequeño llamado pipeta, o en un portaobjetos o una tira reactiva.
Se coloca un apósito sobre el lugar para detener el sangrado.
Preparación para el examen
El bebé no debe ser alimentado por 4 horas antes del examen.
Es probable que la aguja provoque que un bebé o un niño lloren, razón por la cual se debe sujetar muy bien al bebe.
La muestra sanguínea en el laboratorio se realiza un examen de plasma para aminoácidos.
Fundamento
Los aminoácidos plasmáticos corresponden a un examen prueba de detección hecha en bebés que examina las cantidades de aminoácidos en la sangre. Los aminoácidos son los pilares fundamentales para las proteínas en el cuerpo.
Razones por las que se realiza el examen
Un nivel alto de un aminoácido particular es una señal fuerte de que hay un problema con la capacidad del cuerpo para descomponer (metabolizar) ese aminoácido.
Los niveles altos o bajos de aminoácidos en la sangre pueden presentarse con fiebre, nutrición inadecuada y ciertas afecciones.
Este examen se hace para medir el nivel de aminoácidos en la sangre.
Resultados normales
Leucina
Niños: 70 a 170
Tirosina
Niños: 26 a 110
Valina
Niños: 160 a 350
Ácido aspártico
Niños: 0 a 26
Beta-alanina
Niños: 0 a 49
Citrulina
Niños: 16 a 32
Alanina
Niños: de 200 a 450
Ácido alfa amino-N-butírico
Niños: 8 a 37
Arginina
Niños: 44 a 120
DETERMINACION DE AMINOACIDOS EN SANGRE
FUNDAMENTO
La determinación cuantitativa de aminoácidos puede realizarse mediante un analizador de intercambio iónico, mediante cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) con detector fluorimétrico, o mediante cromatografía de gases
Analizador de intercambio ionico
Mediante cromatografia líquida de alta eficacia
Detector fluorimetrico
Cromatografía de gases
Los aminoácidos son marcadores no sólo de enfermedades metabólicas, sino también del funcionamiento de ciertos órganos y de la nutrición.
Aminoacidos en sangre
Esenciales
Arginina, Fenilalanina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina, Metionina, Taurina, Treonina, Triptófano y Valina.
No esenciales
Ácido Aspártico, Ácido Glutámico, Alanina, Asparragina, Cisteína, Glicina, Glutamina, Prolina, Serina y Tirosina.
Diméricos
Anserina, Carnosina, Cistationina y Cistina.
Derivados
beta-Alanina, Citrulina, Homocistina, GABA, Ornitina, Sarcosina, 1-Metil-Histidina, 3-Metil-Histidina, Alfa-Aminoadípico, Hidroxilisina, Hidroxiprolina y Tiaprolina.
Importancia
Controlar la correcta manipulación de la muestra, ya que las condiciones de la toma y su posterior almacenamiento o transporte pueden dar lugar a alteraciones del perfil de aminoácidos que pueden conducir a una interpretación equivocada.
Determinación de creatinina en suero
¿Cuándo hacer el análisis?
Como parte de una revisión básica de salud; cuando los signos y síntomas hacen sospechar que exista una lesión o enfermedad renal.
La creatinina es un producto de desecho producido en los músculos a partir de la degradación de un compuesto conocido como creatina.
Valores de referencia
Menos de 2 años: 0.1 a 0.4 mg/dL
2 años a < 6 años: 0.2 a 0.5 mg/dL
6 años a < 10 años: 0.3 a 0.6 mg/dL
10 años a < 18 años: 0.4 a 1.0 mg/dL
18 años a < 41 años: mujeres: 0.5 a 1.0 mg/Dl
18 años a < 41 años: hombres: 0.6 a 1.2 mg/dL
41 años a < 61 años: mujeres: 0.5 a 1.1 mg/dL
41 años a <61 años: hombres: 0.6 a 1.3 mg/dL
A partir de 61 años: mujeres: 0.5 a 1.2 mg/dL
A partir de 61 años: hombres: 0.7 a 1.3 mg/dL
¿Por qué hacer el análisis?
Para determinar si los riñones funcionan normalmente; para el tratamiento y seguimiento de la enfermedad renal.
Requerimiento de la prueba
Se recomienda que el paciente esté en ayunas o evitar el consumo de carne el día anterior.
¿Qué muestra se requiere?
La determinación se realiza a partir de una muestra de sangre venosa del brazo
La muestra se toma en un tubo tapa roja
Se centrifuga la muestra
Si se conserva en la oscuridad a 2-10 °C,
la estabilidad es de 3 días.
Aplicar los siguientes cálculos en los resultados
Concentracion de urea={(Abs.M)/(Abs.ST)}*[ST]
Verificar si los resultados están dentro de los limites normales
Nota: Siempre debemos guiarnos por las indicaciones de los diferentes reactivos que tenga el laboratorio
Valores de referencia:
Neonatos (<10 días): 6.4 a 53.5 mg/dL Adultos (12-60 años): 15-40 mg/dL mayores de 70 años: 15-50 mg/dL